DERMATOLOGÍA PERUANA - VOL. 12 Nº 1,  ENERO - JUNIO 2002

 


ACTIVIDAD IRRITANTE DE CLEMATIS MONTEVIDENSIS SPRENGEL 
(RANUNCULACEAE). TRABAJO DE INVESTIGACIÓN ORIGINAL     

Ms. Cs. María Eugenia Alvarez 1, Farm. Alejandra Ester Rotelli 2
Dra. Lilian Eugenia Pelzer 2 y Dr. José Roberto Saad 1.




Resumen.-

Clematis montevidensis es conocida en la medicina popular por su uso, como desinfectante. La infusión se utiliza para curar afecciones cutáneas externas [1]. Al aplicarla en forma de cataplasma, se manifiestan sus propiedades vesicantes e irritativas 2.

El objetivo del presente trabajo fue validar científicamente el efecto irritante de infusiones al 10% de la parte área y raíz de C. montevidensis y realizar un estudio fitoquímico que permitiera identificar un principio activo responsable de esa actividad.

Mediante la Prueba Dérmica de Draize en conejos, se comprobó acción irritante en ambas infusiones teniendo mayor efecto la de raíz El estudio fitoquímico permitió caracterizar un butenólido denominado ranunculina conocido glucósido de acción irritante.

Palabras clave: Clematis montevidensis, actividad irritante, Prueba Dermica de Draize, conejo, ranunculina.

Summary.-

Clematis montevidensis is known in folk medicine as disinfectant. Its infusion is used in skin disease. When it is applied as poultice its vesicant and irritant properties are seen. The purpose of this study was to validate scientifically the irritant effect of Clematis montevidensis infusions on root and aerial parts (10%) and carry out the phytochemical study which would allow us to identify an active constituent responsible that activity. The irritant activity vas tested in both infusions through Draize´s method in rabbits, resulting with most effect on the root one. The phytochemica I study allowed us to identify a butenolid named ranunculin, well known because of its irritant action.

Key Words: Clematis montevidensis, irritant activity, Draize's method, rabbit, ranunculin.



Introducción.-

Clematis montevidensis Spreng. Es una liana vulgarmente conocida como "cabello de ángel" "loconte", "bejuco"; tuyá rendivá" [3]. La medicina popular le asigna a esta planta propiedades vesicantes, porque cuando se aplica en forma de cataplasma produce irritación de la piel en el punto de contacto.

En estudios realizados por Southwell I.A. y Tucker D. [4] se informan propiedades similares en Clematis microphylla, mientras que otras especies del género se registran con propiedades cáusticas, rubefascientes y vesicantes [1,2].

En numerosas especies de ranunculáceas se ha identificado la presencia de ranunculina [5], compuesto que produce alta irritabilidad en la piel. Asimismo la bibliografía la cita como precursor sintético de protoanemonina, presente en numerosas especies de ranunculaceas y específicamente en Clematis glycinoides, C. aristataa, C. fawcettii C. gentianoides, C. microphylla, C. microphylla var. leptophylla, C. pubescens (Southwel I.4 todas ellas empleadas por sus propiedades vesicantes.

Estas referencias nos motivaron a estudiar a Clematis montevidensis para valorar biológicamente sus propiedades irritantes y mediante estudios fitoquímicos aislar principios que pudieran ser responsables de dicha actividad.



Material y Métodos.-

MATERIAL VEGETAL:

La muestra (parte aérea y raíz) de C. montevidensis se recolectó en San Luis, Dpto. La Capital, Rodeo del Alto. Su clasificación fue realizada por el Ingeniero L. A. Del Vitto y col. de la Universidad Nacional de San Luis quedando registrada como: Voucher No 8787, 28. V 1997. Una vez seleccionada la muestra en estudio, se mantuvo al abrigo de la luz y se secó a temperatura ambiente. Posteriormente se molieron a polvo fino por separado la parte aérea y raíz, utilizando molino de cuchillas.

PREPARACIÓN DE LAS INFUSIONES DE RAÍZ Y PARTE AÉREA AL 10%:

El polvo fino de raíz (10 gr.), se colocó en una infusionera, se añadio agua destilada hirviendo en una proporción 10% P/V y se mantuvo en contacto durante 20 minutos. Al cabo de ese tiempo se filtró a expresión y se llevó a volumen (100 ml.). De la misma manera se procedió con 10 gr. De parte aérea seca para obtener la infusión respectiva.

PREPARACIÓN DE EXTRACTOS Y ESTUDIO FITOQUÍMICO:

Raíz: el extracto se obtuvo por maceración del material vegetal pulverizado en frío con acetona y se concentró a seco en evaporador rotativo de vacío.

Parte aérea: se realizaron extracciones consecutivas del material vegetal con cloruro de metileno (3 veces), acetona (3 veces) y por último butanol (3 veces) y luego se concentraron en evaporador rotativo de vacío para obtener los extractos correspondientes. Para el estudio fitoquímico de los extractos, se aplicaron técnicas de purificación tales como cromatografías Flash, CC de gel de sílice, y sílica H, se eluyó con n-hexano y mezclas de n-hexano-AcOEt, en concentraciones crecientes de éste. Se aislaron e identificaron estructuralmente por métodos espectroscópicos (H [1] RMN, C [13] RMN, EM) los metabolitos secundarios.

ENSAYO BIOLÓGICO:

Animales utilizados:

Se utilizaron cinco conejos albinos de ambos sexos para cada ensayo, pesando entre 2.5 y 3.5kg, previamente se seleccionaron aquellos que no presentaban ningún signo de lesiones en la piel. Fueron mantenidos en jaulas individuales, de capacidad adecuada, perfectamente ventiladas, y a una temperatura mínima de 20°C ± 2°C, con una provisión de 150 gr. de comida en forma de gránulos por día y por conejo. (Ganave - Pilar S.A.- Bs. As), la provisión de agua fue ad libitum.

Prueba de irritabilidad:

Se realizó la "Prueba Dérmica de Draize en conejos" [6,7], para determinar la irritación primaria como resultado de la aplicación de la sustancia de prueba, localizada en el punto de contacto y que se manifiesta a las 24 hrs. de la aplicación de la misma. Los cinco conejos fueron rasurados en su parte dorsal y delimitada el área de trabajo a ambos lados del lomo. En el lado derecho se realizan excoriaciones de 2 cm aproximadamente (incisiones epidérmicas, sin llegar a la dermis, ni producir sangrado). En el lado izquierdo se trabaja con piel intacta.

Parches de gasa estéril de 2.5 x 2.5cm. aproximadamente, embebidas en 0.5 ml. de las infusiones fueron colocados y fijados en ambos lados del animal, sobre las áreas delimitadas de trabajo. Transcurridas las 23 hrs de contacto, se retiran las gasas, y pasada 1 hora se observó las reacciones cutáneas que puedan haberse producido. Se realizó una segunda lectura a las 48 hrs de la primera.

 

CUADRO 1:
Eritema y formación de escara.

Reacción cutánea

Tiempo de exposición (horas)

Valor de evaluación

Raíz

P. aérea

CONEJO 1:
Piel intacta
Piel intacta
Piel escoriada
Piel escoriada
Sub total

 
24
72
24
72
rr

 
2
0
3
3
8

 
0
1
1
1
2

CONEJO 2:
Piel intacta
Piel intacta
Piel escoriada
Piel escoriada
Sub total

 
24
72
24
72
rr

 
3
1
3
3
10

 
1
0
3
2
6

CONEJO 3:
Piel intacta
Piel intacta
Piel escoriada
Piel escoriada
Sub total

 
24
72
24
72
rr

 
2
2
3
1
18

 
1
2
3
1
6

CONEJO 4:
Piel intacta
Piel intacta
Piel escoriada
Piel escoriada
Sub total

 
24
72
24
72
rr

 
2
1
2
1
6

 
2
1
2
1
6

CONEJO 5:
Piel intacta
Pïel intacta
Piel escoriada
Piel escoriada
Sub total

 
24
72
24
72
rr

 
3
3
3
3
12

 
3
0
3
2
8

CONEJO 6:
Piel intacta
Piel intacta
Piel escoriada
Piel escoriada
Sub total

 
24
72
24
72
rr

 
3
1
3
2
9

 
2
1
2
1
6


CUADRO 2:
Eritema y formación de escara.

Reacción cutánea

Tiempo de exposición
(horas)

Valor de evaluación

Raíz

P. aérea

CONEJO 1:
Piel intacta
Piel intacta
Piel escoriada
Piel escoriada
Sub total

 
24
72
24
72
rr

 
0
0
0
2
2

 
0
0
0
1
1

CONEJO 2:
Piel intacta
Piel intacta
Piel escoriada
Piel escoriada
Sub total

 
24
72
24
72
rr

 
1
0
3
2
6

 
0
0
2
1
3

CONEJO 3:
Piel intacta
Piel intacta
Piel escoriada
Piel escoriada
Sub total

 
24
72
24
72
rr

 
2
2
3
3
10

 
0
3
3
3
9

CONEJO 4:
Piel intacta
Piel intacta
Piel escoriada
Piel escoriada
Sub total

 
24
72
24
72
 
rr

 
2
1
2
1
6

 
2
1
2
1
6

CONEJO 5:
Piel intacta
Pïel intacta
Piel escoriada
Piel escoriada
Sub total

 
24
72
24
72
rr

 
3
3
3
3
12

 
3
0
3
2
8

CONEJO 6:
Piel intacta
Piel intacta
Piel escoriada
Piel escoriada
Sub total

 
24
72
24
72
rr

 
3
1
2
1
7

 
2
0
2
1
5



Resultados.-

A. ESTUDIO FITOQUÍMICO:

Parte aérea: Se identificaron p-hidroxicinámico, estigmasterol, campesterol, sitosterol y ácido oleanólico.

Raíz: Se identificaron estigmasterol y su 3-O-b-D-glucósido, sitosterol, campesterol y ranunculina (Fig. 1).

 


Figura 1:
Ranunculina glicósido irritante aisaldo de Clematis montevidensis.

 

B. ENSAYO BIOLÓGICO:

En el Cuadro 1 y 2 se muestran los resultados obtenidos; los mismos han sido determinados teniendo en cuenta los valores que se asignan a las diferentes reacciones cutáneas según Tabla 1 (Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 1988), y según el sistema de puntuación que fija el índice de irritación primaria Tabla 2 [7].

 

TABLA N° 1
Valores asignados a las reacciones cutáneas por la Farmacopea de Estados Unidos Mexicanos (1988).

Reacción cutánea Valor
Eritema y formación de escara:
No eritema
Eritema muy ligero (apenas perceptible)
Eritema bien definido
Eritema de moderado a severo
Eritema severo a formación de escara
(heridas de profundidad)
 
0
1
2
3
4
Formación de edema Valor
No edema
Edema muy ligero
(apenas perceptible)
Edema ligero
Edema moderado
(elevación de aproximadamente 1mm)
Edema severo (elevación mayor de 1 mm) y
extendiéndose más allá del área de exposición
0

1
2

3
4

 

TABLA N° 2
Índice de irritación primaria (J. Officiel de Republique Francaise, 1973).

Índice de Irritación Cutánea Primaria Clasidicación de la sustancia Test
Menos de 0.5
Desde 0.5 hasta 2
Desde 2 hasta 5
Desde 5 hasta 8
No irritante
Levemente irritante
Moderadamente irritante
Severemente irritante

 

Estos resultados permiten concluir que ambas infusiones se comportan como "moderadamente irritantes", mostrando mayor efecto la infusión de raíz (Tabla 3).

 

TABLA N° 3
Prueba dérmica de Draize en conejo de las infusiones de Clematis montevidensis.

Muestra ensayadas IIPC
Infusión 10% parte aérea
Infusión 10% raíz
2.25
3.75


Discusión.-

Nuestros resultados han permitido mediante reconocidas pruebas experimentales biológicas afirmar el poder irritante de las infusiones de Clematis montevidensis Spreng. (Ranunculaceae). Los estudios fitoquímicos demuestran la presencia de ranunculina, butenólido conocido en la bibliografía por ser causante de irritación en la piel [5], y precursor sintético de protoanemonina, principio tóxico aislado de numerosas plantas, como Clematis glycinoides, C. aristataa, C. fawcettii, C. gentianoides, C. microphylla, C. microphylla var leptophylla, C. pubescens [4], que produce principalmente estomatitis, gastroenteritis, dermatitis [8].

Este estudio experimental valida científicamente el efecto observado en la medicina popular de Clematis montevidensis.


Agradecimientos:

Al Ingeniero Luis A. Del Vitto del Herbario de la Universidad Nacional de San Luis, por la clasificación del material vegetal y el asesoramiento botánico. A Sr. Mario Soloa por la asistencia técnica, Este trabajo fue financiado con subsidio de la secretaría de Estado de Ciencia y Tecnología a través del proyecto 7301, UNSL, dirigido por el Dr. Óscar S. Giordano.



Ver Bibliografía



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1 Área de Qca. Orgánica "Dr. Antonio T. D'Arcángelo.
2 Cátedra de Farmacología. Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia.




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