Folia Dermatológica Peruana
- Vol. 10 • Nº. 1 Marzo de 1999


Efecto cicatrizante del
Piper angustifolium R. & P. sobre lesiones de piel inducidas en animales de Experimentación

TRABAJO DE INVESTIGACIÓN ORIGINAL

Dres. J. Arroyo(1), B. Pareja(2), J. Raez(3)

 

RESUMEN

La finalidad de la presente investigación fue comprobar el efecto cicatrizante de los extractos acuoso y alcohólico de las hojas de Piper angustifolium R & P. Se identificaron los principios activos responsables de la actividad farmacológica, los cuales se determinaron como metabolitos secundarios, presentes en una fracción del extracto administrado, obteniéndose una fracción farmacológicamente más efectiva, por contener flavononas, flavonas o isoflavonas. Experimentalmente se observó mejor efecto cicatrizante con la administración del extracto alcohólico por vía peroral que por la tópica en lesiones inducidas en lomo del ratón, evidenciado porque los tratados con matico necesitaron mayor fuerza de tensión en gramos para abrir la lesión cicatrizada, y así como por la presencia de una reacción granulosa cicatricial al estudio histológico.

Palabras clave: Estudios de cicatrización y Piper angustifolium.


SUMMARY

The purpose of the present investigation has been to prove the healing effects of the water and alcoholic extracts of the leaves of Piper angustifolium R. & P. We identified the active molecules responsible of the pharmacological action which were identified as the secondary metabolites present in the administered fraction of the extract which contained flavonones, flavones or isoflavones. We also observed a better healing effect with the use the alcoholic extract per-oral applied in experimental wounds in the loin of mice than by the externaly route.

Key Words: Piper angustifolium and studies of healing.


Folia. Dermatol. (Perú) 1999; 10 (1): 48-51


INTRODUCCIÓN

El Piper angustifolium R.& P. o Piper aduncum, o Piper elongatum, es una planta conocida como: "matico" (MacBride, 1937); cordoncillo, moho-moho, hierba do soldado (Soukup). Sus hojas y ramas contienen aceites esenciales, ácido artánico, resinas, sustancias amargas (maticina), taninos, alcaloides, saponinas, flavonoides triterpenoides (Palacios V., 1993). Los taninos contribuyen a la actividad cicatrizante (LipKin M., 1971; Oliveira Souza F.M. y col, 1991); los flavonoides tienen propiedades antioxidantes y protectoras de la membrana celular (Aguwa C. y col, 1994); los estudios de Orjala y col., (1994) comprobaron la actividad antibacteriana de los dihidrochalconas que se hallan en el Piper aduncum. En Haití las hojas de Piper aduncum, en forma de cocimiento, son utilizadas por la vía peroral para los golpes, así como también para dolores abdominales. Palacios V. (1993), reporta que en el Perú es utilizada para infecciones e inflamaciones.

La presente investigación ha evaluado el efecto de las hojas de Piper angustifolium R y P sobre las lesiones de piel inducidas en ratones, mediante administración peroral y tópica, teniendo en cuenta como criterios de evaluación a la fuerza de tensión expresada en gramos necesaria para abrir la lesión cicatrizada, así como por la cantidad y forma de fibroblastos evaluados al estudio histológico.


MATERIAL Y MÉTODOS

MATERIAL:

A. Material Biológico

Hojas de Piper angustifolium R y P; ratones albinos consanguíneos, cepa Balb C 53, de ambos sexos, con uno o dos meses de edad, de 20 a 25 g de peso corporal promedio al inicio del estudio; fueron sacrificados por dislocación cervical.

B. Reactivos

Etanol de 96°; Pentobarbital al 6,5%; Hematoxilina-eosina; N-hexano Q.P.; Metanol Q.P.; Cloroformo Q.P.; Ácido sulfúrico Q.P.; Ácido clorhídrico Q.P.; Neomicina, bacitracina, glicina, L-cisteína, DL-treonina: (cicatrín); Sales del ácido tioglicólico (crema depilante suave, Opilca); Polyoxyethylenesoorbitan monooleate sigma (Tween 80); Cromatoplacas de sílica gel G-60 (Merck).

C. Equipo de Laboratorio

Sonda metálica para administración peroral; horno microondas Goldstar; bomba de vacío; columna de cromatografía; cromatoplacas; balanza analítica; dinamómetro nacional; equipo de disección.


METODOLOGÍA

A. Recolección, estabilización y desecación de la planta

Las hojas colectadas de la ciudad de Huariaca sobre los 3000 msnm fueron limpiadas con cuidado y estabilizadas. Para la estabilización, se colocaron en bolsas plásticas añadiéndose gotas de alcohol de 96°, se cerró la bolsa y se agitó. Se las desecó colocando unos 20 gramos de hojas en el horno microondas por 3 minutos.

B. Preparación de extractos acuoso y alcohólico

Extracto acuoso, 100 g de hojas secas y molidas, se sometieron a infusión, luego se filtró y se desecó mediante refrigeración a 5°C por tres días. Extracto alcohólico, 100 g de hojas secas y molidas, se maceró en alcohol de 96° por 8 días; luego se filtró y se desecó a temperatura ambiente por 3 días.

C. Estudio fitoquímico preliminar

La detección de metabolitos secundarios se realizó mediante pruebas fisicoquímicas de caracterización (Lock, 1988).

D. Actividad cicatrizante

Se utilizó el método de Vaisberg y col. (1989). A 136 ratones albinos, distribuidos al azar en 17 grupos, se les depiló el lomo con un depilatorio comercial, después de un reposo de 24 horas se realizó una incisión a todos los animales, luego se les aplicó tópicamente dos veces al día los extractos bajo la forma de gel, excepto al control, por 72 horas, luego se les eliminó por dislocación cervical y se procedió a medir la fuerza o tensión en gramos (g) que abrían la herida cicatrizada con un dinamómetro.


Ensayo cicatrizante por administración peroral:

Ochenta y ocho ratones tomados al azar, se dividieron en once grupos de ocho animales cada uno; al primer control se le administró solución de Tween al 1% a la dosis de 5 ml/kg (agua destilada para el acuoso y solución de Tween al 1% en agua destilada para el alcohólico); 5 grupos recibieron extracto acuoso, a las dosis de 50 mg/kg, 100 mg/kg, 150 mg/kg, 200 mg/kg, 250 mg/kg; y a los últimos 5 grupos se les dió extracto alcohólico a las dosis de 50 mg/kg, 100 mg/kg, 150 mg/kg, 200 mg/kg, 250 mg/kg respectivamente.

Ensayo cicatrizante por administración tópica:
Se distribuyeron al azar cuarenta y ocho ratones, en seis grupos de ocho animales cada uno; el primero fue control, recibiendo por vía tópica el vehículo sin extractos; el segundo y tercero recibieron extracto acuoso; el cuarto y quinto extracto alcohólico, ambos en gel al 20% respectivamente; al último grupo se les dio Cicatrín crema, usado como patrón farmacológico.


RESULTADOS

1. Influencia sobre la fuerza de tensión para abrir la herida:

En el Cuadro 1 se aprecia el efecto cicatrizante en ratones con los extractos acuoso y alcohólico de Piper angustifolium, administrados una vez al día; observándose que se necesitó mayor fuerza de tensión, expresada en gramos, para abrir la lesión tratada con el extracto alcohólico, siendo de 71,0 y 59,6 gramos, por la vía tópica y oral respectivamente para abrir la herida cicatrizada, a un nivel de significación del 5% (estadística F=32, 136>F 5,106; 5%).

Cuadro 1

Valores medios en gramos (VM)± Desviación estándar (DE), de actividad cicatrizante, obtenidos al inducir lesiones en el lomo del ratón (n=8).

Eficacia de cicatrización (%) = [(gramos que abren piel cicatrizada)/gramos para abrir piel sana] x 100 Significancia, Análisis de varianza, F = 32,136 (p=0,00001). El extracto alcohólico necesitó mayor fuerza de tensión en gramos para abrir la herida cicatrizada, después de tres días de tratamiento.


2. Estudio histológico

Al examen macroscópico, se constata ratones blancos recientemente sacrificados, que mostraron heridas cortantes de un centímetro de longitud en el dorso de la piel depilada; sobre el tercio inferior de los animales tratados con matico por vía peroral y tópico, así como los del grupo control. En los ratones tratados tópicamente, se ha observado una piel más gruesa y de coloración amarillo verdoso.

Al examen microscópico, el grupo control (foto 1) presentó una solución de continuidad al corte transversal, apreciándose una formación costrosa que incluye detritus celulares y hematíes, parte de la costra aún se encontraba adherida a la superficie granulosa; la piel aún no tiene continuidad, el lecho de la herida muestra formación fibrosa incipiente con presencia de fibroblastos y mononucleares.

El grupo tratado con matico por vía oral (foto 2), al corte transversal reveló soluciones de continuidad con placa costrosa que cubre el lecho de la herida; de las paredes de la lesión se mostraban fibroblastos y discreto aumento de la colágena, en la dermis existían fibroblastos, haces fibrilares en mayor cantidad que el grupo control, existiendo una franca reacción granulosa cicatricial.

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Foto 1. Piel lesionada de grupo control Foto 2. Piel lesionada bajo tratamiento de Piper
Angustifolium R & P (matico), vía peroral

En el grupo tratado con matico tópicamente (foto 3), mostró una lesión con costra superficial y escasa, con presencia de fibroblastos en el lecho y haces fibrosos en menor cantidad que en el grupo tratado con matico por vía peroral, verificándose buena reacción granular.

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Foto 3. Piel lesionada bajo tratamiento de Piper
Angustifolium R & P (matico)


DISCUSIÓN

En la presente investigación se ha comprobado que las hojas de Piper angustifolium R. & P. bajo las formas de extracto acuoso y extracto alcohólico han mostrado eficacia farmacológica como cicatrizante. Un estímulo (mecánico, físico, químico o biológico) sobre la membrana celular induce aumento de la actividad de la fosfolipasa A2, liberación de histamina del mastocito, activación de la cascada del ácido Araquidónico,y un incremento de otras sustancias vasoactivas, Goodman y col. (1996). Por otro lado, Ballesteros J. y col. (1995),demostraron que los flavonoides del tipo de las chalconas y sus derivados flavonas, inhibieron la peroxidación enzimática; evidenciando que la chalcona 3b presentaba una disminución dependiente de la dosis referente a la actividad de la fosfolipasa A2, la generación del TXB2 de las plaquetas humanas y degranulación del neutrófilo humano. Esta chalcona ejerce un efecto antiinflamatorio tópico en ratones; estos hallazgos explicarían el efecto cicatrizante obtenido en ratones (Cuadro1).

El estudio histológico corrobora el estudio macroscópico, indicando que se ha tratado de heridas cortantes, por presentar bordes netos y una separación limpia de sus paredes; además, por tener las características de cabeza, cuerpo y cola. Del estudio microscópico, se observó que en todos los grupos había una capa de degranulación, en virtud a una reacción natural de cicatrización, sin embargo, hubo diferencias en la cantidad y forma de fibroblastos, siendo mayor en los animales que recibieron tratamiento por vía peroral, siguiéndole los tratados por vía tópica, lo que evidencia una mayor velocidad de cicatrización por neofibrogénesis.


CONCLUSIÓN

El Piper angustifolium R & P (matico) demostró mayor efecto cicatrizante en lesiones inducidas sobre la piel del ratón albino, administrado por vía peroral, seguido por los que recibieron tratamiento por vía tópica.


REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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