PERÚ: EVALUACIÓN DE LA CALIDAD DE DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA 0bregón George1 , Zavaleta Alfonso2,3.
Introducción Dentro del amplio espectro de productos evaluados por métodos de control de calidad cabe mencionar a los de diagnóstico clínico, debido a su importancia en la aplicación terapéutica en clínica humana y en particular a los discos de sensibilidad antimicrobiana. La conveniencia del control de calidad en dichos productos es fundamental, pues asegura la validez de los resultados de los análisis clínicos y como consecuencia directa de ello el establecimiento de una terapia antibiótica eficaz mediante la utilización adecuada de diversos productos farmacéuticos. La existencia de microorganismos resistentes a la acción de dichos productos farmacéuticos convirtió el desarrollo de pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en una necesidad práctica0,2. La prueba de sensibilidad con discos de papel, conocidos también como discos de sensibilidad antimicrobiana, fue una de las primeras pruebas realizadas y es en la actualidad una de las más ampliamente aceptadas2,3,5. El mercado peruano cuenta con discos de sensibilidad antimicrobiana de fabricación nacional y extranjera, cabe señalar que en el Perú no existe aun una norma técnica especifica Para la evaluación de la calidad de tales discos. Se ha establecido internacionalmente como método de control de calidad la norma M2-A5. aprobada en 1993 por el Comité Nacional para Estándares de Laboratorio Clínico de los Estados Unidos de Norteamérica (NCCLS)6. Para el estudio, se aplicó los criterios de evaluación de esta norma a los 24 lotes de discos de las dos marcas evaluadas durante el período 1997. Asimismo, los datos registrados fueron analizados estadísticamente por medio de la prueba de Límites de Confianza y comparados con los establecidos en la norma M2-A5 del NCCLS, también se utilizó la prueba de Hipótesis sobre Promedios. Se estableció como la hipótesis planteada el que el promedio de ambas soluciones sean iguales. Materiales y métodos Se evaluó un total de 24 lotes de discos de sensibilidad antimicrobiana de dos marcas comercializadas en el mercado peruano una de fabricación nacional (EMERME, Lima Perú) y otra de fabricación extranjera (DIFCO, USA), ambas fueron analizadas según la norma M2-A5: "Funcionamiento de Estándares para las Pruebas de los Discos de Sensibilidad Antimicrobiana" del NCCLS6, la cual está basada en el método de difusión en agar desarrollado por Kirhy-Bauer7. La selección de los lotes se efectuó al azar. Los discos evaluados fueron agrupados en antibióticos ß-lactámicos y no ß-lactámicos debido a que el primer grupo de antibióticos presenta un importante registro histórico así como una amplia utilización quimioterapéutica a diferencia de los antibióticos del segundo grupo que son de aparición más reciente y de uso más restringido8. Los discos fueron enfrentados a las siguientes cepas de referencia: Escherichia coli ATCC 25922. Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 y Staphylococcus aureus ATCC 25923. Los diámetros de los halos de inhibición de los discos de sensibilidad antimicrobiana registrados en los análisis de control de calidad se compararon con los registros de los diámetros de zona indicados en la norma M2-A5, utilizándose para ello la Prueba de Límites de Confianza9. Los discos fueron considerados no conformes en los casos en que el diámetro de la zona de inhibición antibiótica excedió o fue menor en 1mm. al diámetro de zona indicado en la norma. Para comparar si las respuestas de los discos de sensibilidad antimicrobiana de fabricación nacional y extranjera eran similares, se procedió a una Prueba de Hipótesis sobre Promedios9. Finalmente, con la intención de comparar la variabilidad existente entre discos del mismo antibiótico, pero de diferentes marcas se realizó el análisis de Coeficiente de Variabilidad (CV)9. Resultados y discusión VERIFICACIÓN DE LA EFICACIA DE LOS DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA DE FABRICACIÓN NACIONAL Y EXTRANJERA Se obtuvieron tres tipos de no conformidades. En el primer tipo (Figura 1) se presentó deficiencia en la actividad antibiótica de los discos evaluados (discos nacionales de Amicacina 30 µg. Ceftacidina 30 µg. Estreptomicina 10 µg, Gentamicina 10 µg, Norfloxacina 10 µg, Penicilina 10 UI y discos importados de Vancomicina 30 µg). En el segundo caso (Figura 2) se presentó no conformidad por exceso y defecto de actividad antibiótica, esta característica se presentó solo en discos nacionales (Amicacina 30 µg y Gentarnicina 10 µg). En el tercer caso (Figura 3) se presentó exceso en la actividad antibiótica de los discos (discos importados de Amoxicilina/Ácido Clavulónico 20/10 µg, Ampicilina 10 µg, Amicacina 30 µg, Estreptomicina 10 µg y Penicilina 10 UI y discos nacionales de Amicacina 30 µg y Estreptomicina 10 µg).
Se observó que la mayoría (66.7%) de los lotes de discos extranjeros (Tabla 1), cumplieron con los parámetros de la norma. Por otro lado, se pudo observar que los discos de la marca extranjera que fueron no conformes (33,3%), presentaron un exceso de potencia en su respectiva concentración antibiótica, a excepción de la Vancomicina que registró valores menores a los señalados por la norma M2-A5, lo cual hace presumir que estos antibióticos por tener la característica de disminuir en su potencia con el transcurrir del tiempo, haya motivado al fabricante a colocar en el disco una mayor concentración antibiótica con la intención de disminuir este efecto. En cuanto a los lotes de discos nacionales evaluados (Tabla 2), se pudo observar que ellos no cumplieron con la norma M2-A5 en ninguno de los casos. Asimismo, se observó discos nacionales que presentaron halos de inhibición defectuosos a diferencia de los discos extranjeros (Figuras 4 y 5). La no conformidad de estos lotes, probablemente se deba a defectos en la fabricación y/o almacenamiento de los mismos ya que como se verificó los envases no estaban acompañados de desecadores, precintos de seguridad ni otros dispositivos de protección, a diferencia de los lotes de discos de marca extranjera que si presentaron desecadores y precintos de seguridad. COMPARACIÓN ENTRE DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA DE FABRICACIÓN NACIONAL Y EXTRANJERA Se observó que en un 50% de los discos evaluados existió sustento estadístico para aceptar la Hipótesis planteada. Dichos discos fueron: Amicacina 30 µg, Gentamicina 10 µg y Estreptomicina 10 µg. Se determinó que en la mitad de los
casos. los discos nacionales y extranjeros presentaron respuestas similares, por lo que no
existiría diferencia en trabajar con cualquiera de ellos, sin embargo, cabe señalar que
el lote de discos de Gentamicina de fabricación extranjera es el único disco evaluado
que cumple con los requisitos exigidos por la norma, lo cual se explica por que tanto los
discos de Gentamicina nacional como extranjera si bien presentan promedios similares no
tienen los mismos rangos de halos de inhibición antibiótica.
Por otro lado en el 50%, restante de discos se aceptó la Hipótesis alternativa que estableció de que el promedio de ambas poblaciones fueran diferentes. Este comportamiento se presento entre los discos de Ceftazidime 30 µg, Penicilina 10 UI y Norfloxacina 10 µg. Los discos extranjeros presentaron en promedio coeficientes de variabilidad cercanos a 5 (CV=4,93), lo cual se verifica en rangos de actividad estrechos y valores que están dentro de los límites de la norma, a diferencia de los discos nacionales que presentaron en promedio valores mayores (CV=9,97), y como consecuencia rangos que exceden los límites establecidos (Figura 6). Es necesaria a la luz de los resultados obtenidos, la adopción de medidas que regulen la evaluación obligatoria de la calidad de los discos de sensibilidad antimicrobiana, debido a la particular importancia de estos productos de diagnóstico clínico. Un mayor número de evaluaciones permitiría conocer de una manera más precisa la realidad de dichos productos en el mercado peruano, por lo que resulta imprescindible continuar con la investigación en este campo. Agradecimientos A los Sres. Dr. Tomás Agurto y MsC. Andrés Valladolid por su constante apoyo y valiosas orientaciones. Asimismo, al personal del Centro Nacional de Control de Calidad que apoyaron técnicamente a la realización de este estudio.
_____________________________________________ 1 Biólogo, División de Microbiología. Centro Nacional de
Control de Calidad. Instituto Nacional de Salud. Lima. Perú
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