RESUMEN

El presente método adaptado del método oficial AOAC 984:15 Lactose in Milk. Enzimatic method, surge como una propuesta para la estimación y el control de fa calidad de la leche empleada como ingrediente en las papillas provenientes de los programas de Alimentación Complementaria.

El método enzimático está basado en reacciones acopladas, que se inician con la hidrólisis enzimática de la lactósica contenida en la muestra a pH 6,6 y la oxidación de la D-galactosa liberada a ácido D-galactónico con NAD+ a pH 8,6 en presencia de la enzima b-galactosa deshidrogenasa. La cantidad de lactosa y D-galactosa es estequiométrica a la cantidad de NADH formado, cuyo incremento es medido por su absorbancia a 340nm. El método propuesto adapta la etapa de tratamiento o preparación de la muestra (papilla), encontrándose una calidad óptima de los reactivos clarificantes para precipitar las proteínas, obteniéndose después de una etapa de filtrado una solución transparente, lista para continuar con la determinación. La adición de los reactivos c1arificantes a una muestra acuosa forma un precipitado parcialmente soluble al cual por adsorción se unirán loa compuestos de alto peso molecular (interferentes) y precipitarán; se ajusta el pH para lograr una precipitación completa. El sedimento formado es separado de la solución por filtración.

Se evaluó la precisión del método con cuatro analistas, en dos laboratorios diferentes y días diferentes. Se emplearon herramientas estadísticas a fin de comprobar la variabilidad de respuesta entre los analistas, laboratorios y muestras empleadas. El análisis de varianza evaluó la existencia de diferencias significativas de respuesta en dos analistas y la variabilidad en dos de las muestras empleadas. Con los resultados obtenidos, se eliminaron valores atípicos y se calculó la precisión del método en términos de repetibilidad y reproducibilidad.

Se obtuvo una desviación estándar de la repetibilidad (Sr) de 0,44 con una desviación estándar relativa (RSD) de 4,81%, valor aceptable comparado con la precisión que reporta la literatura para leche, que presenta un coeficiente de variación de 4,96%. La Desviación estándar de la reproducibilidad (SR) calculada fue de 0.52 con una desviación estándar relativa (rsd) de 5,7%.

Para la evaluación de la exactitud del método se empleó la prueba t de student; se obtuvo una recuperación promedio de 100,3%. El estadístico t demostró que no existen diferencias significativas entre resuperación media y el 100% para un nivel de confianza del 95%. La literatura reporta excelente recuperación para el método enzimático, y mejora con la experiencia del analista.

Palabras claves: Lactosa, papillas, estandarización, método enzimático.

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1 Centro Nacional de Alimentación y Nutrición, Instituto Nacional de Salud, A.P. 451, Lima, Perú