AISLAMIENTO Y MANTENIMIENTO “IN VITRO” DE 
Plasmodium falciparum

Pardavé B.¹, Arce C.¹, Cabezas C.¹, Carrillo C.¹

47^ava Reunión Anual de la Sociedad Americana de Medicina Tropical e Higiene (San Juan, Puerto Rico, 18-22 de Octubre de 1998)

Resumen

La malaria causada por Plasmodium falciparum es un problema de salud pública severo en varias regiones del Perú, especialmente en la región amazónica.

La resistencia clínica a ciertas drogas antimaláricas, como la Cloroquina y el conocimiento parcial de las cepas de Plasmodium falciparum circulantes entre la población enferma de malaria, nos han inducido a intentar el aislamiento y mantenimiento “in vitro” de P. Falciparum bajo ciertas condiciones de cultivo, con la finalidad de lograr su caracterización.

Se tomaron diez muestras de sangre de pacientes diagnosticados con malaria por P falciparum mediante la prueba de lámina delgada y se realizaron cultivos en medio RPMI-1640 (SIGMA) utilizando el método de Trager y Jenssen. Se suplementó el medio de cultivo con Hepes, Gentamicina, plasma humano inactivado (grupo O), 5% de hematocrito (eritrocitos humanos, grupo O) y se incubó a 37°C.

El medio de cultivo se cambio diariamente y se realizó la evaluación de parásitos utilizando láminas delgadas con tinción Giemsa.

Los resultados mostraron una reproducción de los parásitos en un período de 6 a 31 días. Luego de mantener el cultivo por 60 días, se seleccionaron las células rojas parasitadas que mostraron mayor grado de parasitismo de formas anilladas y se las criopreservó utilizando técnicas standard.

De las diez muestras estudiadas, se pudo lograr el cultivo en ocho casos. Estos parásitos serán caracterizados genéticamente y también se estudiará su resistencia “in vitro”a las drogas antimaláricas evaluadas.

Abstract

Malaria by Plasmodium falciparum is an important Public Health treat problem in several regions of Perú and mainly in the Amazon Basin.

The clinical resistance of antimalaria drugs such as Chloroquine and our partial knowledge of the P. falciparum strain circulations among the sick people induced us to try the isolation and maintenance of P. falciparum under cultural conditions to characterize it.

Blood samples of 10 malarial cases by P. falciparum which diagnosis was made by thick film, were cultured in RPMI-1640 (SIGMA) medium following Trager and Jenssen method. The medium was supplemented with Hepes, Gentamicyn, 10% inactivated human plasma (0 group), 5% ofhematocryte (Human Red Cells, 0 group) and incubated at 37°C.

The culture medium was changed every day an the parasites were evaluated by Giemsa stained films.

The results showed parasite reproduction in a period of 6 to 31 days. After 60 days of maintenance, the parasited Red Cells showing good parasitism ofring forms were cryiopreserved under standard procedures. From the ten malarial studies cases, the culture was able in eight. These parasites will be genetically characterized and its “in vitro” resistance to drugs studied.