INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA COMO
PRUEBA ALTERNATIVA PARA LA CONFIRMACIÓN DIAGNÓSTICA DE INFECCIÓN POR VIH EN EL PERÚ
Valverde Ada, Romero Soledad, Cabezas
César*
Resumen.-
Desde 1990 en el INS-Perú se viene utilizando la técnica de Western Blot (WB) para la
confirmación del Diagnóstico de VIH. En este estudio se evalúa la prueba de
Inmunofluorescencia indirecta (IFI) como una alternativa de confirmación al Western Blot.
Se utilizaron 132 sueros de la seroteca de la División de Virología del INS-Perú con
diagnóstico previo de VIH por WB. Para el diagnóstico de IFI se usó un Kit producido en
el Centro Nacional de Referencia de SIDA (Chile-Argentina). De los 132 sueros procesados
56 (42,4%) correspondieron a Western Blot positivo, 52 (39,4%) a Western Blot negativos y
24 (18,2) con Western Blot indeterminado.
La sensibilidad y especificidad de la técnica IFI en comparación con la de Western Blot
fue de 98,2% y 98% respectivamente. Los valores predictivo positivo y negativo fueron
98,2% y 100% respectivamente. Estos resultados permiten incorporar a la técnica de IFI
como una prueba alternativa para la confirmación del diagnóstico de infección por VIH.
Palabras clave: VIH/SIDA, diagnóstico IFI.
Abstract.-
Since 1990, the National Institute of Health-Peru(INS) has performed the performed the
Western blot technique to confirm HIV diagnosis. This study evaluates Indirect
Inmunolluorescence test (IFI) as an alternative of confirmation by Western blot. One
hundred and thirty-two sera from the Virology Serum Bank at INS previously tested by
Western blot were submitted to IR testing using a kit produced at the AIDS National
Reference Center (Chile-Argentina). A total of 56 (42,4%) of the 132 processed sera were
Western blot positive, 52 (39,4%) were W. blot negative and 24 (18,2%) were W. blot
indeterminate.
Sensitivity and specifity of the IFI test as compared to Western blot's was 98,2% and 98%
respectively. Positive predective value was 98,2% and negative predictive value was 100%.
These results allow us to add the IFI test as an alternate confirmation test for HIV.
Key word: HIV/AIDS, immunofluorescence, diagnostic, IFI. |
Introducción.-
Desde la aparición del SIDA en el mundo en 1981, y luego del descubrimiento del VIH, se
han venido desarrollando técnicas de diagnóstico para VIH [1]. Actualmente se cuenta con
las técnicas rápidas, ELISA, Westem Blot (WB), Inmunofluorescencia (IFI), Radio inmuno
precipitación (RIPA), reacción en cadena de la polimerasa (PCR) [4]; sin embargo en los
países en vías de desarrollo, la aplicación de todas estas técnicas son limitadas.
Para las pruebas de tamizaje se utilizan las pruebas rápidas y la técnica de ELISA, las
cuales no están libres de resultados falsos positivos, pues tienen especificidad menor al
100% siendo necesaria la realización de pruebas confirmatorias como el WB e IFI.
Una técnica con alta sensibilidad y especificidad para la detección de anticuerpos
contra VIH como el WB se viene utilizando en el Perú, sin embargo su alto costo impide
que se le adopte como una técnica rutinaria de confirmación de la infección por el VIH.
Una técnica con alta sensibilidad y especificidad como la IFI es una prueba confirmatoria
alternativa recomendada por la OMS [2], con la ventaja adicional de ser más económica
que las otras pruebas confirmatorias. Siendo importante el desarrollo de tecnologías que
se adapten a la realidad latinoamericana, en la IV Reunión de Directores de Laboratorios
de Referencia de SIDA (Costa Rica 1991) [3,5] se mostró el interés de los países en el
uso e implementación de la técnica de IFI como prueba suplementaria, siendo uno de los
acuerdos que Chile-Argentina, produzcan y estandaricen los reactivos para IFI, para ser
suministrados a 10 países latinoamericanos que soliciten participar en el "Proyecto
de IFI para el diagnóstico de VIH en Latinoamérica", con el auspicio de la OPS/OMS.
Dentro de este marco realizamos un estudio comparativo de las técnicas de IFI y WB en el
Instituto Nacional de Salud del Perú, con el objetivo de considerar la incorporación de
la técnica de IFI en la confirmación de infección por el VIH.
Materiales y Métodos.-
MUESTRAS BIOLÓGICAS
Se incluyeron para el estudio; 132 sueros que previamente habían sido procesados por la
técnica del WB, procedentes de la seroteca de la división de Virología del Instituto
Nacional de Salud, Perú.
Estos sueros fueron sometidos a la prueba de IFI, para lo cual se utilizó un Kit
producido en el Centro Nacional de Referencia de SIDA (Argentina-Chile) del Lote 1-2-3-4
(Junio 1994). Dicho Kit contenía el Antígeno H9+ VIH Subtipo B, conjugado Cappel a la
dilución 1/160 y dilución de muestra 1/10.
PRINCIPIOS DEL ENSAYO
Si en el suero del paciente existen anticuerpos anti VIH, estos se unirán al antígeno
viral que está en las células adheridas al portaobjeto. Este complejo es detectado
mediante la adición de anti-inmunoglobulina humana conjugada con fluoresceina al pocillo.
Finalmente la reacción es observada mediante un microscopio de fluorescencia.
PROCEDIMIENTOS
Para el procedimiento se utilizó la técnica estandarizada para la realización de la
prueba IFI [3], y para la lectura se utilizó un microscopio de fluorescencia de
epiluminación marca Carl-Zeiss Jenamed, corredera de filtro 510 para luz ultravioleta y
objetivos de 40x y 100x.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
El suero control positivo presentaba fluorescencia en el 25% de las células con la
morfología típica del antígeno. El suero control negativo y el control de PBS no
presentaban fluorescencia. Para la interpretación se consideraron los siguientes
criterios:
* Reacción positiva: Fluorescencia típica de membrana en el número correcto de células
según control positivo (Fig. 1)
 |
Fig. 1: Reacción
Positiva en IFI. |
* Reacción negativa: ausencia de
fluorescencia. (Fig. 2)
 |
Fig. 2: Reacción
negativa en IFI. |
* Reacción inespecífica: presencia de
Fluorescencia en células infectadas y no infectadas que impide la interpretación
correcta.
Resultados.-
De los 132 sueros incluidos, 56 (42,4%) correspondieron a WB positivos, 52 (39,4%) WB
negativos y 24 (18,2%) a WB indeterminado. Los resultados comparativos del ensayo se
muestran en la Tabla 1.
TABLA N°
Ensayo comparativo entre las pruebas de Western Blot e IFI. |
| IFI |
Western
Blot |
| Positivo |
Negativo |
Indeterminado |
Positivo
Negativo
Inespecífico |
55
0
01 |
01
51
0 |
1
09
14 |
| TOTAL |
56 |
52 |
24 |
La sensibilidad y especificidad de la
prueba de IFI en comparación con la de WB fue de 98,2% y 98% respectivamente.
Los valores predictivo positivo y predictivo negativo fueron 98,2% y 100% respectivamente,
para la misma comparación de dichas pruebas.
Discusión.-
La efectividad de las pruebas de diagnóstico para el SIDA depende de variables, como el
momento de la infección en el que se tomaron las muestras, la competencia técnica del
personal de laboratorio, la calidad de los especímenes y del equipo, el tipo de prueba,
los controles usados para validar la prueba y la estrategia de la misma [2]. La prueba de
ELISA es la que usualmente se realiza para el tamizaje de infección por VIH, mientras que
el inmunoblot o Western blot, es la prueba de confirmación más comúnmente utilizada,
sin embargo su elevado costo y la falta de recursos de los pacientes y de los programas de
control impide adaptarla como para ser utilizada como prueba confirmatoria en nuestro
país.
La prueba de Inmunofluorescencia indirecta, que se utiliza también para la confirmación
diagnóstica, teniendo una sensibilidad y especificidad similar al WB, tienen la ventaja
de su menor costo, el menor tiempo y la simplicidad de su ejecución [6,7].
Diferentes estudios efectuados con la IFI han mostrado una sensibilidad y especificidad
del 99% y 98,9% respectivamente [1,2].
En nuestro estudio se obtuvo 98,2% de sensibilidad y 98% de especificidad, esta
sensibilidad es similar a la del WB, sin embargo la menor especificidad alcanzada tiene el
inconveniente de presentar falsos positivos aunque en un bajo porcentaje. Estos hallazgos
han sido discutidos en otros estudios en los que se indica que pueden darse incluso falsos
negativos por IFI en muestras de pacientes que no tenían alto riesgo de infección por
VIH [1]. Es probable que al incrementar el tamaño muestral este porcentaje sea
significativamente menor. Un aspecto que debe considerarse cuando se utiliza IFI es la
capacidad del personal que permite una menor variabilidad en los resultados; por lo que
cuando se empieza a utilizar esta técnica debe siempre compararse con el patrón de
confirmación que es el WB antes de ser sustituido por el IFI.
En relación a los resultados inespecíficos (1,51%) la alternativa es repetir la prueba
con una dilución de 1:100; si aún con ello no se tiene un resultado concluyente, se
recurre al WB [8].
Los resultados obtenidos en este estudio, nos permitirán incorporar a la técnica IFI
como una prueba alternativa para la confirmación diagnóstica de infección por el VIH
quedando el WB para ser utilizado en los casos en los que la IFI resulte inespecífico.
Adicionalmente la incorporación de la IFI reducirá significativamente los costos,
permitiendo también la transferencia de esta tecnología a los laboratorios de referencia
regional.
Bibliografía
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* Laboratorio Nacional de Referencias de VIH / SIDA, Centro
Nacional de Laboratorios de Salud Pública, Instituto Nacional de Salud, A.P. 451 Lima,
Perú.
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