PARTE EXPERIMENTAL

3.1.- DISEÑO METODOLÓGICO DE LA INVESTIGACIÓN

3.1.1.- Universo y muestra:
El universo de estudio esta dado por la población de Santa Filomena, que asciende a 320 habitantes, siendo la variable principal de estudio CONTINUA "Niveles de Hg en orina de 24 horas" y la población señalada FINITA al que se aplicó la siguiente formula para hallar el número de muestra:

Donde:

Los valores de "x" y "s" respectivamente se obtuvieron de la prueba piloto realizada en el año 1998 en la Comunidad Minero Artesanal de Huanca, distrito de Santa Lucía, departamento de Ayacucho, de similares características y aplicada en iguales condiciones.

Aplicando los valores del piloto a la población de Santa Filomena y considerando una confiabilidad muestral de 95% y un error relativo de 10% el tamaño de la muestra poblacional se obtuvo reemplazando los datos en la formula:

n = 29

De lo que se desprende que la selección de 31 muestras es estadísticamente correcta, confiable y aceptable.


3.1.2.- Métodos e instrumentos para la recolección de datos: 

El trabajo utilizará los siguientes instrumentos de recolección de información :

- Cuestionario estructurado ( encuesta)
Encuesta que nos permitió conocer los aspectos generales de la población en estudio, edad, sexo, tiempo de exposición, (Anexo N° 1 )

- Análisis cuantitativo. 
El dosaje de mercurio en muestras de orina en 24 horas. 

- Lista de chequeo . 
Se verifica la aplicación de pasos a seguir en la colecta, tratamiento y transporte de la muestra. (Anexo N°5 )

- Guía de pasos para manipulación de muestras de mercurio en zonas rurales.
(Anexo N° 3 )

3.1.3.- Procedimientos: 

• Tramites de autorización de la población.

• Firma de la autorización de consentimiento por la población informada sujeto de estudio.

• Aplicación del cuestionario 

• Colección de la muestras

• Aplicación de la lista de chequeo

• Lectura de muestras

3.1.1.- Parte experimental: 

- Metodología y análisis 
- Toma de muestra
- Tratamiento de la muestra 
- Traslado
- Método a utilizar 

3.1.4.- Plan de tabulación y análisis:
Para la tabulación de los resultados se utilizó el paloteo (medios mecánicos) , y para el análisis de los resultados los instrumentos de la estadística descriptiva (porcentajes). 

3.1.5.- Informe final 
Los datos se presentan en cuadros y gráficos que permiten la exposición clara y didáctica de los resultados hallados mediante la presente investigación. 

3.2.- MATERIAL Y TÉCNICA OPERATORIA

3.2.1.- DETERMINACIÓN DE MERCURIO EN ORINA

3.2.1.1.- Método Utilizado: Espectrofotometría de Absorción Atómica por Generación de Hidruros en Frío.

3.2.1.2.- Fundamento:
Cuando la solución de Borohidruro de Sodio es utilizada como reductante. La reacción violenta y la liberación de hidrógeno ayuda a la descarga del mercurio metálico de la solución y éste a su vez es transportado por una corriente de Nitrógeno como vapor de mercurio a las celdas de cuarzo.

3.2.1.3.- Parámetros de Operación:

3.2.1.4.- Reactivos:

- H2SO4 grado analítico
- HNO3 grado analítico
- Solución de KMnO4 al 5%
- Borohidruro de Sodio
- Hidróxido de Sodio
- Agua desionizada

3.2.2..- CONDICIONES OPTIMAS PARA EL ANÁLISIS DE MERCURIO

3.2.2.1.- Utilizando NaBH4 como reductante

• SOLUCIÓN STOCK: Contiene 1000 µg/ml Hg.

• SOLUCIÓN ESTÁNDAR: 1 µg Hg/ml (en 1.5% HNO3, estabilizada con la adición de unas gotas de KMnO4 al 5 %)
  
  - Alícuotas para Calibración: 100, 200, 500 µL. Correspondientes a: 100, 200, 500 ng Hg.
  - Diluyente: HCl o HNO3 al 1.5%
  - Volumen de calibración: 10 ml

• REDUCTANTE: NaBH4 al 3% en NaOH al 1%

3.2.2.2.- Interferencias:
Si se produce espuma, se añade 0.5 ml - 1.0 de Tributil Fosfato (agente antiespumante)

3.2.2.3.- Solución Estándar:
1 µg Hg/ml (en mezcla ácida 1.5% de HNO3, 1.5% H2SO4 con la adición de 5 gotas de solución de KMnO4 al 5%).

3.2.3.- Equipo:

- Espectrofotómetro de Absorción Atómica Perkin Elmer 3300 con Sistema de Generación de Vapor Frío MHS - 10. 

- SENSIBILIDAD: 4.60 ng Hg 1% Absorbancia

- VERIFICACIÓN DE LA SENSIBILIDAD: 10 ml de 0.025 µg/ml Hg (250 ng) dan una absorbancia de aproximadamente 0.2.

3.2.4.- Volumen de Muestra a preparar: 10 ml 

3.3.- MÉTODO OPERATORIO:
La curva de calibración es establecida por volúmenes de la solución estándar correspondientes a 0.02 µg, 0.05µg y 0.1µg Hg en 10 ml de mezcla ácida (1.5% del HNO3, 1.5% H2SO4).

1 ml de la alícuota de la muestra es dispensada en el frasco de reacción, al que se añade 5 gotas de la solución de KMnO4 al 5%, se mezcla bien y se añade 9 ml de la mezcla ácida (1.5% de HNO3, 1.5% H2SO4). (028)