DETECCIÓN DE
ANTICUERPOS CONTRA PESTIVIRUS EN RUMIANTES DE UNA COMUNIDAD CAMPESINA DE LA PROVINCIA DE
CANCHIS, CUSCO
Sonia Alvarez Ll.1, Hermelinda
Rivera G.2, Danilo Pezo C.3 y Wilber García V.3
. RESUMEN
. INTRODUCCIÓN
. MATERIAL Y MÉTODOS
. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
. CONCLUSIONES
RESUMEN |
Los pestivirus constituyen
un género de la familia Flaviviridae, conformado por el virus de la Diarrea Viral Bovina
(VDVB), el virus de la Fiebre Porcina Clásica (VFPC) y el virus de la Enfermedad de la
Frontera (VEF); agentes relacionados estructural y antigénicamente que presentan
reacciones cruzadas entre ellos (Carlsson, 1991; Sakoda et al., 1999) y causan infecciones
entre especies (Becher et al., 1999). El éxito en los rumiantes es debido a su habilidad
de cruzar la barrera placentaria, invadir el feto y generar una infección persistente que
continua durante la vida postnatal, clínicamente inaparente, excretando el virus y
diseminándolo a un amplio rango de hospederos Artiodactyla (Becher et al., 1997; Paton et
al., 1999).
La transmisión puede ser por inhalación o ingestión de saliva, descarga oculonasal,
orina, heces, leche, secreciones uterinas, fluido amniótico, placenta y semen de animales
infectados (Baker, 1995). Los pestivirus poseen un especial tropismo por las células del
sistema inmune y células epiteliales de los tractos reproductivo, entérico y
respiratorio ocasionando como consecuencia de su replicación en estas células un
conjunto de patologías dependiendo de la cepa viral y momento en que ocurre la infección
durante la gestación (Potgieter, 1995).
Estudios serológicos han demostrado la presencia de la DVB en alpacas de una empresa
asociativa de Puno (Rivera et al., 1987) y de una comunidad campesina con crianza mixta de
Arequipa (Manchego, 1991), pero no ha sido detectado en alpacas criadas bajo un buen
sistema de manejo (Risco et al., 1998).
Más del 80% de los camélidos en el sur del país están en manos de pequeños criadores
que utilizan el sistema de crianza mixto, el cual promueve la transmisión interespecie de
los pestivirus (Rivera et al., 1987). El bajo índice de natalidad y la mortalidad
neonatal constituyen severos problemas en la crianza de camélidos en crianza mixta y el
rol de los pestivirus en la presentación de estos problemas aún no ha sido elucidada,
por lo que el presente trabajo tuvo como objetivo determinar la seroprevalencia del VDVB y
VEF en alpacas, bovinos y ovinos de crianza mixta en una comunidad campesina.
Animales y
muestras
El estudio se realizó en una comunidad campesina de Silly, localizada en la Provincia de
Canchis, Cusco. Se utilizaron 200 alpacas, 38 bovinos y 45 ovinos hembras criollos
adultas, que eran parte del grupo mixto de producción de la comunidad.
El tamaño muestral para la población de alpacas (n=200) se obtuvo mediante el método
para estimar una proporción a través de la aproximación normal a la distribución
normal, utilizando para su cálculo una proporción de 0.14 y un nivel de confianza del
95% (Manchego, 1991). El número de bovinos y ovinos utilizados en el estudio estuvo en
función de las posibilidades de la comunidad.
Las muestras de sangre fueron obtenidas individualmente por punción de la vena yugular
utilizando vacutainers, y transportadas al Laboratorio de Microbiología del
IVITA-Maranganí de la Facultad de Medicina Veterinaria (FMV) de la Universidad Nacional
Mayor de San Marcos (UNMSM) para la obtención del suero sanguíneo. Las muestras
procesadas fueron transportadas al Laboratorio de Virología de la FMV, UNMSM donde fueron
mantenidas en congelación a –20°C hasta su procesamiento.
Reactivos
Se utilizaron cultivos primarios de células de cornete nasal de feto bovino (CNB) libres
de VDVB y VEF como sistema indicador de prueba de neutralización viral; me
dios de cultivo MEN (Eagle Minimal Essencial Medium) y L-15 (Leibovitz) (SIGMA) en una
proporción 50:50 suplementadas con el 10% de suero fetal bovino libre de VDVB (SIGMA) y
antibióticos. Las cepa “Singer” del VDVB y la cepa Cosbay del VEF, obtenidas
comercialmente (NVS, AMES-IOWA, USA) fueron utilizadas como antígenos en la prueba de
neutralización viral.
Detección de anticuerpos pestivirales
La detección y cuantificación de los anticuerpos contra el VDVB y VEF fue realizada
separadamente mediante la prueba de neutralización viral según el protocolo disponible
en el Laboratorio de Virología de la FMV-UNMSM. El título del suero fue la dilución
más alta capaz de neutralizar las 100 DI50CC/50µl del virus, evidenciado por la ausencia
de lesión celular. Títulos del suero iguales o mayores a 1:2 fueron considerados
positivos a anticuerpos.
El 11.5 (23/200) y 9.5%
(19/200) de las alpacas adultas fueron seroreactoras al VDVB y al VEF frente a 73.7
(28/38) y 76.3% (29/38) en bovinos y 13.3 (6/45) y 15.5% (7/45) en ovinos, respectivamente
(Cuadro 1).
La habilidad de los pestivirus de cruzar la barrera de especie (Brownlie et al., 1998)
debería ser altamente favorecida en un sistema de crianza mixto pero, al parecer, la
infección pestiviral en los camélidos sudamericanos tiene un patrón diferente como lo
indica el bajo nivel de alpacas seroreactores al VDVB y VEF, pese a que ambos virus
tuvieron amplia distribución en bovinos del mismo rebaño.
La seroprevalencia del VDVB en alpacas resultó similar (11.1%) a lo reportado por Rivera
et al. (1987) y Manchego (1991) hace más de una década. Esta baja seroprevalencia de los
pestivirus en alpacas adultas sugiere la existencia de factores que disminuyen la
transmisibilidad viral hacia los camélidos. Algunos de estos factores podrían ser la
directa incidencia de los rayos ultravioleta que no permitiría la sobrevivencia viral,
así como el sistema de pastoreo en donde los bovinos pastan primero seguido por las
alpacas y después los ovinos.
No hay duda de la susceptibilidad de las alpacas a los pestivirus como lo demuestran los
estudios de Rivera et al. (1987) y Manchego (1991), pero al parecer el mecanismo de la
infección pestiviral en las alpacas difiere de los otros rumiantes pues usualmente cuando
el VDVB ingresa a un hato de bovinos susceptibles se difunde rápidamente, los animales
seroconvierten y los anticuerpos perduran en niveles detectables por un tiempo largo
(Fredriksen et al., 1999).
Se pudo determinar que más del 30% de las alpacas presentaron títulos de anticuerpos
contra el VDVB y VEF mayores a 1:256 (Cuadros 2 y 3) los cuales en animales no vacunados
son considerados títulos altos y significan un continuo desafío o infecciones
recientemente adquiridas a partir de animales infectados como lo indica Luzzago et al.
(1999). En este caso es probable que la infección provenga a partir de los bovinos, ya
que esta especie es la principal fuente de infección a otras especies (Carlsson, 1991;
Paton et al., 1999) o durante las exposiciones de alpacas, bovinos u ovinos en las ferias
comunales en donde son confinados animales de diversos estados sanitarios.
El permanente estado de estrés debido a fallas nutricionales, carga parasitaria, manejo
deficiente etc., podrían estar favoreciendo la circulación de los pestivirus DVB y EF en
los bovinos de la comunidad como lo indican los títulos de anticuerpos detectados que van
desde 1:8 hasta mayores a 1:256 para el caso del VDVB (Cuadro 2) y con ligeras variaciones
en el caso del VEF (Cuadro 3), sugiriendo diversos grados de exposiciones de los bovinos y
ovinos a ambos virus.
| Cuadro 1. Seroprevalencia de los
virus de la Diarrea Viral Bovina (DVB) y Enfermedad de la Frontera (EF) en rumiantes de
crianza mixta, mediante la prueba de neutralización viral. |
| Especie | N.° Animales | Positivos a DVB | Positivos a EF | ||
| Alpacas | 200 | 23 | 11.5 | 19 | 9.5 |
| Bovinos | 38 | 28 | 73.7 | 29 | 76.3 |
| Ovinos | 45 | 6 | 13.3 | 7 | 15.5 |
| Cuadro 2. Distribución de los
títulos de anticuepos contra el VDVB en muestras de suero de rumiantes mediante la
prueba de neutralización viral |
| Especie | Positivos | Inversa de la dilución de los títulos de anticuerpos | |||||||
| % | 2 | 4 | 8 | 16 | 32 | 64 | 128 | >256 | |
| Alpacas | 11.5 | 0 | 0 | 0 | 0 | 3 | 3 | 9 | 8 |
| Bovinos | 73.7 | 0 | 0 | 3 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
| Ovinos | 13.3 | 1 | 0 | 2 | 1 | 0 | 0 | 0 | 2 |
| Cuadro 3. Distribución de los
títulos de anticuepos contra el VDVB en muestras de suero de rumiantes mediante la
prueba de neutralización viral |
| Especie | Positivos | Inversa de la dilución de los títulos de anticuerpos | |||||||
| % | 2 | 4 | 8 | 16 | 32 | 64 | 128 | >256 | |
| Alpacas | 9.5 | 1 | 1 | 0 | 0 | 1 | 2 | 7 | 7 |
| Bovinos | 76.3 | 0 | 0 | 0 | 8 | 3 | 10 | 2 | 6 |
| Ovinos | 15.5 | 0 | 0 | 1 | 3 | 0 | 0 | 1 | 2 |
En el presente estudio se
utilizó la cepa Cosbay (VEF) como antígeno para detectar anticuerpos contra el VEF en
las tres especies de rumiantes de la comunidad, esperándose encontrar en el ovino una
prevalencia mayor o igual al reportado en el bovino (76.3%), pero sólo el 15.5% de ovinos
fueron reactores al VEF. Esta diferencia frente al bovino podría ser debido al escaso
número de muestras o que el VEF no está muy difundido en los ovinos de la comunidad.
La alta prevalencia del VEF en los bovinos no podría deberse necesariamente a
la mayor susceptibilidad del bovino al VEF, sino a la similitud antigénica entre las cepa
Cosbay y la cepa de la DVB utilizadas como antígenos, ya que algunas cepas del VEF y VDVB
poseen homologías en sus secuencias de nucleótidos (hasta de 76%, Sullivan et al.,
1994).
Esto podría explicar en parte los similares porcentajes de seroreactores encontrados en
cada especie estudiada (Fig.1).
| Fig. 1 Seroprevalencia de los virus de la Diarrea Viral Bovina y Enfermedad de la Frontera en rumiantes de crianza mixta |
 |
La distribución de los
títulos de anticuerpos contra el VEF sugieren igualmente una actividad viral en la
población de ovinos estudiados pero al parecer menos intensa que en el bovino y alpacas
(Cuadro 3).
Los datos recogidos directamente de los campesinos de la comunidad, por no existir
registros de la situación sanitaria, indican que la enterotoxemia es una de las
principales causas de la mortalidad neonatal en las alpacas. Sin embargo, los problemas
respiratorios y diarreicos, y los nacimientos de crías débiles son prevalentes en la
comunidad, superando al 24% reportado en sistemas con buen manejo sanitario (Risco et al.,
1998).
Las seroprevalencias de 11.5 y 9.5% de los VDVB y VEF en alpacas de la comu-
nidad de Silly sugieren que estos pestivirus no tendrían mayor responsabilidad en los
diversos problemas de orden sanitario que afecta al rebaño de la comunidad. Sin embargo,
no debe descartarse su asociación con las pérdidas embrionarias o fetales y mortalidad
neonatal, que tienen una alta incidencia, especialmente en los animales de las comunidades
campesinas.
No se dispone de datos sobre la seroprevalencia de la DVB en bovinos de las comunidades
previamente estudiadas pero la prevalencia de la DVB encontrada en los bovinos de la
comunidad de Silly es similar a lo reportado en las cuencas lecheras como Lima, Cajamarca,
Arequipa y el Valle del Mantaro que superan el 70% (Rivera H., datos no publicados;
Contreras et al., 2000). Así mismo, es similar a otros países como Polonia (83%),
países escandinavos (55 a 100%), Reino Unido (62.5%), Estados Unidos (65%), Italia
(71.2%), Chile (50%), etc., indicando que este virus esta ampliamente distribuido en la
población bovina mundial (Houe, 1999; Luzzago et al., 1999; Nuotio et al., 1999).
Se detectaron anticuerpos
neutralizantes contra los pestivirus de la diarrea viral bovina (DVB) y enfermedad de la
frontera (EF) en los rumiantes (alpacas, bovinos y ovinos) de la comunidad campesina de
Silly, provincia de Canchis, Cusco bajo el sistema de crianza mixto con escasa
tecnología.
La población de bovinos estudiados presentó el mayor número porcentual de reactores
tanto para la enfermedad de la diarrea viral bovina y enfermedad de la frontera, que los
ovinos y alpacas examinadas.
Bibliografía
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1 Práctica privada
2 Laboratorio de microbiología y parasitología, FMV-UNMSM. E-mail: hriverag@vet.unmsm.edu.pe
3 Estación experimental IVITA-Maranganí, FMV-UNMSM
