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CONCORDANCIA DE LAS PRUEBAS DE ELISA Y HEMAGLUTINACIÓN INDIRECTA EN EL DIAGNÓSTICO DE LA TOXOPLASMOSIS PORCINA
Francisco Suárez A.1, Heitor Andrade Jr.2,
Andrés
Galisteo2 y Omar Miguel3
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SUMMARY
The study aimed to estimate the level of agreement between two serological diagnosis tests for toxoplasmosis in swine. The ELISA and the Indirect Hemagglutination Test were evaluated using blood sera collected in slaughterhouses from 303 pigs in Sao Paulo, Brazil and 93 pigs in Lima, Peru. The Kappa coefficient of agreement on the Brazilian sera was 26.0% and the confidence interval at 95% were 7.7 - 44.3% (P <0.05), whereas on the Peruvian sera was 36.6% and the confidence interval at 95% were 18.0 - 55.3% (P <0.01). Besides this, when considering the ELISA test as the reference test, the Indirect Hemagglutination Test had a co-positive reaction of 48.3% and a co-negative reaction of 86.5% in the Brazilian sera, and a co-positive reaction of 80.6% and a co-negative reaction of 61.3% in the Peruvian sera.
Key words: toxoplasmosis, ELISA, hemagglutination, serology |
Entre las pruebas serológicas disponibles para el diagnóstico de toxoplasmosis se tienen las pruebas de fijación de complemento (Nicolaus y Ravelo, 1937), Sabin-Feldman, (Sabin y Feldman, 1948), Hemaglutinación (Jacobs y Lunde, 1957), Inmunofluorescencia (Goldman, 1957) y ELISA (Venkatesan y Wakelin, 1993).
La prueba de fijación de complemento detecta anticuerpos tardíamente y durante poco tiempo (Walton, 1971). La prueba de Sabin-Feldman que sigue considerándose la prueba de referencia, según Amato Neto (1971), es poco práctica para investigaciones epidemiológicas, peligrosa porque usa toxoplasma vivo, sufre influencia del tamaño del ratón inoculado para el mantenimiento de la cepa y necesita del factor accesorio, representado por el suero negativo; mientras que la prueba de inmunofluorescencia tiene la desventaja de requerir equipo sofisticado (microscopio) para trabajo de campo.
La prueba de hemaglutinación se viene utilizando para el diagnóstico de rutina en clínicas y hospitales veterinarios (Behymer et al., 1973). El antígeno es de fácil obtención en el comercio y ofrece resultados rápidos (cerca de dos horas). Además tiene otras ventajas como requerir pequeña cantidad de sangre o suero (puede colectarse gotas en papel filtro), y una mayor facilidad de ejecución e interpretación de
resultados.
La prueba inmunoenzimática ELISA, ha mostrado claras ventajas sobre otras pruebas. Se pueden analizar muchas muestras en forma simultánea con poco equipo sofisticado, comparado con la prueba de inmunofluorescencia, y los resultados obtenidos ofrecen mayor consistencia y son más confiables que las obtenidas con la hemaglutinación (Waltman et al., 1984). Además, la prueba de ELISA tiene alta sensibilidad y especificidad y puede detectar tanto infecciones recientes como latentes de toxoplasmosis, detectando simultáneamente anticuerpos IgM e IgG (Romero et al., 1995).
Con base a estas consideraciones y con la finalidad de estudiar comparativamente las pruebas de hemaglutinación indirecta y ELISA en el diagnóstico de toxoplasmosis porcina se realizó el presente estudio.
Se utilizaron sueros de porcinos sacrificados en frigoríficos comerciales de Sao Paulo-Brasil (n=303) y de Lima-Perú (n=93).
Se usó el kit comercial Salk HAP-Toxoplasmose, que es una prueba de hemaglutinación indirecta que detecta anticuerpos anti-Toxoplasma gondii en muestras de sangre. Esta prueba se estandarizó siguiendo el procedimiento recomendado por Venkatesan y Wakelin (1993). Los sueros patrones positivo y negativo fueron gentilmente donados por el Departamento de Medicina Veterinaria Preventiva de la Universidad Estatal de Londrina-Paraná, Brasil.
Se aplicó el coeficiente de Kappa a los resultados para medir la concordancia entre las pruebas serológicas empleadas (Cohen, 1960); igualmente se calculó la copositividad y la conegatividad.
Los resultados obtenidos con los sueros brasileros se muestran en el Cuadro 1. Un total de 251 muestras (82.8%) resultaron concordantes y 52 (17.2%) discordantes. Sin embargo, al calcular el coeficiente de concordancia Kappa, se encontró una concordancia de 26.0% con intervalo de confianza (95%) de 7.7 a 44.3% mostrando significancia estadística (P<0.05). Esta concordancia es menor a la citada por Ishizuka et al. (1986) de 69.2% cuando utilizaron las pruebas de hemaglutinación e inmunofluorescencia para el diagnóstico de toxoplasmosis porcina. Por otro lado, utilizando la prueba de ELISA como prueba de referencia, se calculó que la copositividad y conegatividad de la prueba de hemaglutinación indirecta fue de 48.3 y 86.5% respectivamente; lo que corrobora el hallazgo de Carlier et al. (1980), mostrando que la hemaglutinación indirecta fue más específica que sensible en estos animales.
Cuadro 1.
Comparación de los resultados de las pruebas de hemaglutinación
indirecta ELISA en sueros de Brasil.
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HI
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ELISA |
Total |
| |
Positivos |
Negativos |
|
Positivos
Negativos |
14
15 |
37
237 |
51
252 |
| Total |
29 |
274 |
252 |
IC0.95:
[7.66<k>44.28]
k=25.97
Z=2.48
Ksignificante (P< 0.05) |
El Cuadro 2 muestra los resultados obtenidos con los sueros del Perú. Se puede observar que 63 sueros mostraron concordancia total; sin embargo, al eliminar la concordancia debida al azar el coeficiente de concordancia Kappa mostró un valor de 36.6% con intervalo de confianza (95%) de 18.0 a 55.3%, mostrando alta significancia estadística (P<0.01). Considerando el ELISA como prueba de referencia, la hemaglutinación indirecta mostró una copositividad de 80.6% y co-negatividad de 61.3%.
Por otro lado, al adoptarse la prueba de ELISA como referencia, la prueba de hemaglutinación indirecta presentó una copositividad de 48.3% y conegatividad de 86.5%, que es debida a la presencia de mayor cantidad de falsos negativos.
Bibliografía
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1 Laboratorio de Medicina Preventiva, FMV-UNMSM. E-mail:
francisco_suarez2001@hotmail.com
2 Instituto de Medicina Tropical, USP-Sao Paulo-Brasil
3 Facultad de Salud Pública, USP-Sao Paulo-Brasil
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