Prueba de Digestibilidad in vitro

Luisa Leyva¹, Teresa Arbaiza F.², Felipe San Martín H .² y Fernando Carcelén C.²

Abstract

In vitro digestibility test with different artiricial saliva proportions in alpacas

The objective of this study was to determinate the correct relationship between artificial spittle and rumen fluid in alpaca forage using the in vitro digestibility teclinique. Three fistualted 4 years old, 50 kg. male huacayas were fed high (Rye grass of 3-4 weeks growth), medium (rye grass of 6-8 weeks growth) and low quality (oat straw) forages respectively, with alfalfa hay was used as the standard sample. Each of the 3 forages was treated with artificial saliva:rumen fluid (T) as follows: T₁ 2: 1; T₂ 4: 1; T₃6: 1; T₄ 8: 1 and the in vitro digestibility of dry matter (lVDMI) was evaluated for each treatment. A randomized complete block design ( A x B ) was used, with A being the various artifical spitúe: rumen fluid concentrations and B forage quality, and the results evaluated using analysis of variance and least significant difference (LSD) statistics. No significant difference was found in IVMDMD for all fotir treatments in the high and medium quality forages (F50.05) with T₁, T₂, T₃ and T₄ y¡elding 87.2, 84.5, 87.1 and 84.4 % for high and 85.7, 86.6, 83.0 and 79.2% for medium respectively. Likew¡se, for the low quality forage, T₁, T₂and T₃ y¡elded statistically insignificant results of 54.3, 52.3 and 53.3%, while T₄ produced a sígníficant difference (P<0.01) at 40.4% IVDMD. The results of all 4 treatments on all 3 forage types, y¡elded only one case of reduced dry matter digestibility produced by the high (8: 1) proportion of artificial spitúe to rumen fluid in T 4 on low quality forage.

Key words: In vitro digestibility, artificial saliva, alpacas

Resumen

El presente estudio se realizó con la finalidad de determinar la relación adecuada de Saliva artificial: licor ruminal en alpacas, aplicando la técnica de digestibilidad in vitro. Se utilizó tres alpacas machos con fístula ruminal de la variedad Huacaya, con un peso y edad promedio de 50 kg. y 4 años, respectivamente. Los forrajes que se utilizaron fueron de tres diferentes calidades: alta (rye grass 3-4 sernanas); media (rye grass 6-8 semanas) y baja ( paja de avena), el heno de alfalfa fue la muestra patrón. Los tratamientos de la relación de saliva artificial : licor ruminal fueron : T₁ 2 : 1, T₂ 4: 1, T₃ 6: 1 y T₄ 8 : 1. Los que fueron aplicados a cada forraje. El parámetro a evaluarse fue la digestibilidad in vitro de la materia seca (DIVMS). El diseño experimental fue el irrestricto al azar con arreglo factorial (A x B), siendo el factor A, las concentraciones de saliva artificial y licor ruminal y el factor B, la calidad de forraje. Los datos se analizaron por el análisis de varianza y para la diferencia entre tratamientos se uso el análisis de diferencias mínimas significativa (LSD). La DIVMS en el forraje de alta calidad para los tratamientos ya mencionados, no se halló diferencia estadística significativa (p>0.05, siendo las siguientes 87.2 %, 84.5 % 87.1 %, 84.4 % para T₁, T₂, T₃ y T₄ respectivamente.

Para el forraje de mediana calidad no se halló diferencia estadística significativa (P>0.05) siendo la DIV 85.7 %, 86.6 %, 83 %,79.2 % para T₁, T₂, T₃ y T₄, respectivamente. Para el forraje de baja calidad se halló diferencia estadística significativa (P<0.01) entre el T₄ (40.4%) con los otros tratamientos, T₁, T₂y T₃ (54.3 %,52.3 %,53.3 %). Se concluye que la alta relación de saliva artificial: licor ruminal (T₄) afectó al forraje de baja calidad. Pudiéndose usar relaciones del T₁ al T₃ sin que afecte la estimación de la digestibilidad de la materia seca.

Palabras clave: Digestibilidad in vitro, saliva artificial, alpacas.

Dentro del amplio campo de la fisiología de la digestión, la saliva cumple un rol importante en la bioquímica del primer y segundo compartimento del estómago tanto por el volumen secretado como por su composición. La saliva es una solución tampón de fósfato y bicarbonato, proporciona un medio favorable a los microorganismos del primer y segundo compartimento del estómago, impidiendo bajas del pH ruminal, por acción de los ácidos grasos volátiles, lo que dificultaría la producción y la absorción de los mismos (Cunningham, 1995).

Bajo concentraciones similares de los ácidos grasos volátiles (AGV), el rumen -retículo de los ovinos tiene valores de pH menores que los de la alpaca, debido a una mejor capacidad tamponante de esta última. Este hecho permite al camélido una mayor producción bacteriana debido a que los microorganismos del estómago desarrollan mejor a pH cercanos a la neutralidad (Vallenas, 1970; San Martín y Bryant, 1987).

Las pruebas de digestibilidad in vitro han sido desarrolladas desde los años sesenta (Tilley y Terry, 1963), y simulan la digestibilidad del tracto digestivo de los rumiantes. Sin embargo está técnica no ha sido adaptada a las características digestivas de los Camélidos, que como se señala tienen una diferente capacidad tamponante de los compartimentos 1 y 2.

El presente trabajo tiene como finalidad establecer la proporción óptima de saliva artificial: licor ruminal específica para las alpacas, con el fin de adaptar las técnicas para la estimación de la digestibilidades in vitro en esta especie.

El estudio se realizó en el Laboratorio de Bioquímica, Nutrición y Alimentación Animal, de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos.

Se utilizaron tres alpacas machos con fístula ruminal de variedad Huacaya, con un peso y edad promedio de 50 Kg y 4 años, respectivamente. Los animales recibieron una dieta a base de chala, concentrado y agua ad libitum para lograr la adaptación de la micloflora ruminal a los forrajes a experimentar.

Las muestras fueron colectados en la Estación Experimental IVITA -El Mantaro, y enviados a Lima para su posterior análisis. Los forrajes evaluados fueron: Rye grass 3-4 semanas de edad, Rye grass.6-8 semanas de edad, paja de avena y heno de alfalfa los cuales se clasificaron en tres calidades (alta, media y baja).

Cada forraje (4) fue sometido a la prueba de digestibilidad in vitro con diferentes relaciones de saliva artificial y licor del Compartimento 1 (C ) y Compartimento 2 (C₂ ) . Estas relaciones fueron: 2: 1, 4:1, 6:1 y 8:1. La relación de 4:1 es la relacion usada en la técnica.

Los parámetros evaluados fueron los residuos indigeribles y la digestibilidad de la materia seca.

La digestibilidad in vitro de la materia seca (DIVMS) utilizada fue la técnica descrita por Tilley y Terry (1963). El método consta de dos etapas:

1a Etapa: Se utilizaron muestras por duplicado de 0.5 g de forraje molido y secado a 60 °C por 24 horas, las que fueron transferidas a tubos de ensayo provistos de válvulas Bunsen. En cada corrida se colocaron dos tubos control sin muestras y dos tubos con muestras de digestibilidad conocidas; con el fin de controlar la actividad microbiana entre corridas. Todos los tubos llevaron 50 ml de la solución licor ruminal de alpaca y saliva artificial Mc Dougall en las diferentes proporciones.

La composición de la saliva artificial en gramos por litro fue la siguiente: 9.8 bicarbonato de sodio (NaHCO₃), 7.0 Fosfato ácido de sodio (Na₂ HPO₄ 7H₂0), 0.57 Cloruro de potasio (KCL), 0.47 Cloruro de sodio (NaCl), 0.04 Cloruro de calcio (CaCl₂), 0.12 Sulfato de magnesio (Mg SO₄ 7H₂O ). Esta solución fue burbujeada vigorosamente con CO₂ hasta alcanzar un pH de 6.7.

El material del compartimento 1 y 2 se colectó a través de una fístula ruminal y se llevó inmediatamente al laboratorio (manteniéndose en baño maría a temperatura de 39 °C) El fluido del C₁ Y C₂ se obtuvo fitrando el material del C₁ y C₂ a través de cuatro capas de gasa.

Después de agregar la mezcla de saliva artificial (buffer) y licor ruminal, cada tubo se gaseo con CO 2 durante 15 segundos. Se incubó a 39 °C en baño maría por 48 horas. Durante la incubación los tubos fueron mezclados a mano 4 o 5 veces para permitir un ataque homogéneo del forraje por los microorganismos. Después de 48 horas, la actividad bacterial se detuvo por el agregado de 6 ml de HCL al 20%.

2a Etapa. En esta etapa se le agregó 2 ml de pepsina al 5%. Los tubos se incubaron por otras 48 horas a 39 °C con mezclado alterno.

Después de 48 horas los tubos fueron retirados de la incubadora. El residuo insoluble de la muestra fue lavado con agua destilada caliente (90-100°C); seguidamente se filtró a través de papeles de filtro previamente pesados. Los papeles de filtro con sus respectivas muestras se colocaron a la estufa a 60°C por 48 horas, para posteriormente pesarlos y realizar los análisis de datos respectivos.

Para la evaluación de los resultados del experimento se utilizó el diseño irrestricto al azar, con un arreglo factorial A x B, siendo el factor A los forrajes y el factor B las relaciones saliva artificial: licor ruminal.

En el Cuadro 1 se muestra la composición química de los forrajes utilizados, pudiéndose observar la variación entre forrajes, como es el contenido de fibra cruda, factor que tiene influencia negativa sobre la digestibilidad. Se observa que la paja de avena tiene mayor porcentaje de fibra cruda y menor porcentaje de proteína con respecto a los otros forrajes. El heno de alfalfa posee un mayor porcentaje de proteína, con respecto a los otros forrajes, siendo su porcentaje de fibra cruda relativamente alto.

En el Cuadro 2 al análisis los coeficientes de digestibilidad in vitro de la materia seca (DIVMS), independientemente de la relación de saliva artificial: licor ruminal, se observa diferencias (P< 0.05), entre forrajes. Así la paja tiene la menor DIVMS seguida por la alfalfa y ambos inferiores a los rye grass.

La paja presenta una menor DIVMS explicada a su alto contenido de fibra cruda, y presencia de lignina que la hacen resistente al ataque microbiano. Con respecto a esto Mc Donald y Edwards (1986), señalan que la fracción de fibra bruta de un alimento influye negativamente sobre la digestibilidad.