Introducción

El género Sarcocystis incluye especies altamente patógenas para bovinos (Uggla, 1990), cerdos (Perovic, 1991; Freyre et al., 1992), ovinos, camellos (Hilali y Nassar, 1992; Svobodoka, 1991), caballos (Gunn y Frher, 1992), cabras (Kudi y Aganga, 1991), incluyendo animales silvestres como tejones, ratas, búfalos y monos, entre otros (Khan y Fong, 1992).

En el Perú el Sarcocystis aucheniae (SA) causa infecciones importantes en alpacas y llamas (Guerrero et al., 1967). La infección por S. aucheniae o sarcocistiosis, se traduce en importantes pérdidas económicas para la industria alpaquera derivada no sólo de la disminución de la producción y la productividad animal, sino por la pérdida de su valor comercial y/o el decomiso de la carcasa. Esta enfermedad es reconocida como una zoonosis parasitaria (Leguía, 1988).

Se reconoce que, los sarcoquistes se encuentran adaptados en músculo y sistema nervioso central, sin aparente reacción del animal infectado. Se presume la ruptura de algunos sarcoquistes en algún momento de la infección con probable liberación de productos tóxicos, no existiendo claridad sobre el rol que juega en los procesos de sarcocistiosis crónica (Tadros y Laarman, 1982). La actividad neurotóxica fue demostrada por Hiepe et al. (1981) denominando al producto como Sarcocistina. Este producto ha sido considerado como una endotoxina de acción en músculo cardíaco y tejido nervioso gastrointestinal (Briggs y Foreyt, 1985). Estudios preliminares utilizando proteína de bradizoitos de macroquistes sonicados (5 mglml) de S. aucheniae, demostró su acción letal en conejos (Sam, 1988). Así Mismo, existen evidencias de trastornos gastroentéricos en personas que consumieron carne cruda infectada con SA (Leguía, 1989), y con S. hominis (Hiepe et al., 1979).

Los antecedentes anteriormente mencionados sobre el efecto letal de diferentes extractos de Sarcocystis en animales y la falta de información sobre el efecto biológico de SA motivó el presente estudio, dirigido a evaluar las manifestaciones clínicas y alteraciones histopatológicas en función de las dosis administradas en conejos, cobayos y ratones.

Preparación y características del inóculo

El inóculo consistió en un lisado de Macroquistes de Sarcocystis aucheniae (LMSA). El LMSA fue producido a partir de macroquistes intactos y libres de tejido muscular estriado de alpacas naturalmente infectadas. Los MSA fueron homogenizados (Coming-PC 351), lisados por ultrasonicación (Fisher-300) a 60 ciclos en intervalos de 30 segundos por cuatro veces y centrifugado a 12,000 g/30 minutos. El lisado conteniendo 5,6 mg de proteína/m1 fue diluido en solución salina fósfatada (pH 7,2; 0,15 M) para su uso como inóculo. Las proteínas contenidas en el lisado fueron demostradas electroforéticamente en gel de Sulfato Dodecil Sódico Poliacrilamida (SDS-PAGE) al 12% (Laemmli, 1970).

Animales y administración del inóculo

Se inocularon vía subcutánea 12 conejos machos de 2,5 kg de peso vivo (p. v.) en grupos de 2 animales por dosis de 1,0 ml conteniendo 50, 100, 200, 400, 800 y 1600 ug de proteínas de LMSA por kg de p. v.

Los conejos fueron observados permanentemente postinoculación (p.i) a fin de identificar alteraciones clínicas. La necropsia fue practicada para evaluar las lesiones anatomo-histopatológicas en cada grupo.

Cuarenticuatro ratones blancos machos entre 25 a 30 g de p.v. fueron inoculados vía intraperitoneal con LMSA en dosis de 0,1 ml conteniendo 20, 40, 80, 120, 160, 180, 200, 400, 800 y 1600 ug de proteína/ Kg p.v. Los animales se observaron por 12 horas continuas y luego periódicamente durante 8 días.

Dos cobayos de 650 g de p.v. fueron inoculados vía subcutánea con una dosis de 800 ug de proteína de LMSA por kg de p.v., en un volumen de 1,0 ml. Los animales inoculados se observaron durante doce horas continuas y luego periódicamente hasta las 48 horas.

Grupos controles de conejos(2), ratones(4) y cobayos(2) fueron inoculados con una solución salina tamponada (pH 7,2; 0. 15M)

Examen Histopatológico

Secciones de hígado, pulmón, riñón, corazón y músculo esquelético, de todos los conejos muertos fueron fijados en una solución de formalina tamponada al 10% y posteriormente procesados rutinariamente; embebidas en parafina y seccionadas entre 4-6 micras y teñidas con hematoxilina y cosina para su posterior examen al microscopio de luz.

Características electroforéticas del LMSA

En el lisado sonicado de MSA se observó un perfil de movilidad electroforética compuesta por 15 bandas proteicas entre 25 a 127 KDa.

Efecto biológico de LMSA en conejos

El total de conejos inoculados con las diferentes dosis de LMSA, mostraron alteraciones clínicas severas desde una hora postinoculación hasta que ocurrió la muerte, entre las 5 a 23 horas. El tiempo de sobrevivencia de los animales fue dependiente a la cantidad de proteína administrada en el inóculo (Cuadro 1). La literatura científica sólo refiere información de la actividad biológica tóxica de extractos de SA en conejos en dosis altas de 5 mg/ml (Sam, 1988), desconociéndose la dosis mínima letal en ésta y otras especies animales. La literatura científica cita el efecto letal de extractos de bradizoitos de especies de Sarcocystis diferentes a S. aucheniae en conejos (Tadros y Laarman, 1982; Hiepe et al., 198 1; Scott, 1943).

Los signos clínicos observados consistieron en postración, disnea, pupila contraida, diversos grados de diarrea e hipertemia. El incremento de la temperatura puede ser atribuida a la inducción de pirógenos endógenos como mecanismo de defensa del organismo por la toxina. La dosis letal estaría en rangos menores a 50 ug de proteína/kg de peso vivo.

Imagen histológica normal fue observada en pulmones de los conejos del grupo control (Fig. 1A). Lesiones histopatológicas fueron encontradas en todos los órganos examinados y la severidad de las mismas fueron dependientes de la dosis administrada. El pulmón fue el órgano más afectado mostrando tres tipos de alteraciones, severa hiperemia, neumonitis, espasmo arterial y arteriolar y cambios concomitantes como enfisema, colapso y hemorragia (Fig. 1B).

Los cambios vasculares y alteraciones pulmonares apreciadas en las arterias, parecen constituir un espasmo de la musculatura, asociada al efecto de la toxina sobre el endotelio vascular.

La neumonitis, alteración constante en los conejos afectados, aparentemente no representa una modificación directa atribuible a la toxina; los animales controles no presentaron esta alteración. Chrisp y Niels (1991), reporta el caso de neumonía en conejos inoculados con toxina de Pasteurella multocida la misma que causa rinitis atrófica en cerdos.

En riñones, la estructura glomerular fue afectada, mostrando aumento de volumen de moderado a severo, tumefacción glomerular, severa congestión, así como trastornos degenerativos del epitelio tubular. En riñones de los conejos del grupo control no se reconocieron alteraciones (Fig. 2A y 2B).

En el hígado se observó una severa congestión de vasos portales y sinusoldes hepáticos; así como, la presencia de proceso degenerativo agudo en hepatocitos, caracterizado por degeneración turbia, hiperplasia de los conductos biliares, y edema en el tejido conjuntivo de los espacios portales. Lesiones histológicas en hígado causadas por merogonlas de Sarcocystis han sido descritas en animales silvestres y ratones (Garner et al., 1997; Paperna y Finkelman, 1996).

El miocardio presentó trastornos circulatorios agudos, caracterizados por hiperemia, hemorragias y procesos degenerativos de fibras miocárdicas observadas como degeneración hidrópica a degeneración de Zenker. El músculo esquelético no mostró ningún tipo de alteración al examen microscópico.

Efecto biológico del LMSA en cobayos y ratones

Los ratones y cobayos Moculados con LMSA no mostraron signos clínicos. Estos resultados coinciden con los observados por Hiepe et al. (1981), quienes afirman que 1 a potencia de esta sustancia tóxica varía entre diferentes especies del parásito, o que algunas especies de hospederos son resistentes al efecto tóxico.

Por los resultados expuestos, se concluye que los lisados de macroquistes (le S. aucheniae, contienen compuestos proteicos con acción tóxica compatibles con los constituyentes de la toxina denominada Sarcocistina referida por Senaud y Cerná (1978) y Hiepe et al. (1981). Este producto ocasiona la muerte en conejos, debido a alteraciones agudas en órganos vitales, especialmente en órganos detoxificadores, como el riñón e hígado. Asimismo, se demostró la resistencia de ratones y cobayos a la acción tóxica del LMSA.

Ver Literatura Citada

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1. UNMSM-FMV-IVITA
E. mail: d170031@unmsm.edu.pe
2. Práctica privada

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