EVIDENCIA DEL VIRUS DEL SINDROME REPRODUCTIVO Y RESPIRATORIO PORCINO DE CRIANZA TECNIFICADA. María E. Alegría1, Hermelinda Rivera2 y Alberto Manchego2
Abstract The seroprevalence of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV) was determined in 29 well managed pig farms from Lima valley. A total of 220 blood samples from finishing pigs was collected at the slaughterhouses in Lima city. Specific PRRSV antibodies were detected using an ELISA test (Herd Check, IDEXX). A 13 .6 + 4.53% (30/220) of animals and 17.3% (5/29) of farms tested reacted positively against PRRSV; the seroprevalence of PRRSV in the positive farms was 76.9% (30/39). Among the 5 of the 29 positive farins there was a prevalence of 12.5 % (n=1), 60% (n=1) and 100% (n=3) of infected animals. These results evidence the presence of PRRSV in Peru with high prevalence and a recent viral activity into these positive farms as showed by the coefficient absorvance from 0.44 to 2.39 of positive sera. The results also evidence that PRRSV is not widely distributed in pig farms from Lima Valley Key words: pig, PRRSV, antibodies, ELISA test.
Resumen El presente estudio tuvo por objetivo determinar la seroprevalencia del virus causante del Síndrome Reproductivo y Respiratorio Porcino (VPRRS) en porcinos de granjas tecnificadas del Valle de Lima. Con este fin, animales de 29 granjas porcinas fueron muestreadas durante su beneficio en los mataderos de Lima Metropolitana obteniéndose un total de 220 muestras de sangre de porcinos de apariencia normal de 20 a 22 semanas de edad. La detección serológica de los anticuerpos contra el VPRRS fue realizada mediante la técnica de ELISA (Herd Check, IDEXX). El estudio demostró que el 13.6 + 4.53 % (30/220) de las muestras presentaron anticuerpos contra el VPRRS. Las muestras positivas a anticuerpos fueron detectadas en el 17.3% (5.29) de las granjas muestreadas y la prevalencia del VPRRS en estas granjas positivas fue de 76.9 % (30/39). La difusión del virus dentro de las granjas positivas varía entre 12.5% (n=1), 60% (n=1) y 100% (n=3) de animales infectados, así como una reciente actividad viral al mostrar anticuerpos con coeficientes de absorvancia entre 0.44 a 2.39. Estos resultados demuestran la presencia del VPRRS en el país, pero que aparentemente no está ampliamente difundido en las granjas porcinas del Valle de Lima. Palabras clave: porcino, VPRRS, anticuerpos, ELISA.
Introducción El Síndrome Reproductivo y Respiratorio Porcino (PRRS) es una enfermedad infecciosa de etiología viral que afecta al porcino y le ocasiona problemas reproductivos caracterizados por partos prematuros, momificación fetal, nacimiento de crías muertas o débiles, alta mortalidad predestete y problemas respiratorios especialmente en los animales en crecimiento y acabado. Clínicamente la enfermedad puede presentarse en forma aguda, crónica y subclínica con persistencia viral (White 1991, Lager, et al., 1995). La enfermedad fue observada por primera vez en Carolina del Norte, USA entre 1988-1989. Por la dificultad en la identificación del agente causal se le denominó Enfermedad misteriosa del cerdo, poco después fue observada en el Canadá y a partir de 1990 en Europa, actualmente su distribución es mundial (Terpstra, et al., 1993; Done, et al., 1996; Zimmerman, et al., 1997). El PRRS es causada por el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (VPRRS). El VPRRS es una partícula pleomórfica de 45-65 nm y un genoma constituido por una molécula de ARN de cadena simple asociado a una cubierta proteica y una envoltura externa. El genoma viral codifica al menos 7 diferentes proteínas cuyas funciones aún no están bien caracterizadas. Las proteínas de mayor importancia inmunogénica son la N de 15 Kda que constituye el nueleocúp-side viral y es el antígeno de grupo y la proteína de 25 Kda altamente glicosilada y asociada a la envoltura viral denominada también glicoproteína E (Thiel, et al., 1993; Conzelman, et al., 1993; Murtaugh, et al., 1995). La glicoproteína E induce la formación de los anticuerpos neutralizantes en el animal, está sujeta a cambios antigénicos y es el antígeno de serotipo viral. Esta glicoproteína interviene también en la adherencia del virus al receptor de la célula susceptible durante su biogénesis (Loemba, et al., 1996). El VPRRS posee dos serotipos: el serotipo europeo y el norteamericano (Wensvoort, et al., 1992, Nelson, et al., 1993). El análisis de la secuencia de nueleótidos del ARN de ambos serotipos indican una diferencia de 40%. El virus muestra un 59 a 70% de similitud en la secuencia de nueleótidos, organización y estructura genómica con los virus Elevador del Lactato Dehidrogenasa (ELD), Fiebre Hemorrágica del Simio (FHS) y el virus de la Arteritis Viral Equina (AVE), siendo su relación más estrecha con el virus ELD (Meulenberg, et al., 1994). El VPRRS muestra especial tropismo por los macrófagos alveolares, monocitos tipo II y células endoteliales de los vasos capilares del porcino (Wensvoort, et al., 1993), en los cuales se replica produciendo un despoblamiento de hasta 40% de estas células ocasionando problemas respiratorios y una profunda inmunosu-presion (Yoon, et al., 1996). Del tracto respiratorio el virus puede diseminarse en todo el organismo y con efectos devastadores en las marranas gestantes sobre todo cuando el virus ingresa a la granja por primera vez. Estudios epidemiológicos indican que las granjas que sufren una infección por el PRRS, permanecen persistentemente infectadas (Wills, et al., 1997). Al parecer los pocos eficientes anticuerpos neutralizantes y de lenta aparición permiten una prolongada viremia y pueden favorecer la infección de los macrófagos en lugar de neutralizar al virus (Yoon, et al., 1997). A pesar de la difusión mundial del PRRS, en el Perú no existen reportes clínicos ni de laboratorio previos sobre esta enfermedad; sin embargo, los problemas respiratorios y reproductivos son frecuentes en muchas granjas porcinas. Por otro lado, la fuente de reemplazo de los reproductores es casi exclusivamente de animales y/o germoplasma importados de USA y Europa, lugares donde la enfermedad es prevalente, por lo que, el objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia de anticuerpos contra el VPRRS dentro del contexto de la vigilancia epidemiológica de las enfermedades del porcino.
Materiales y Métodos a. Animales y muestras. Se obtuvieron muestras de suero sanguíneo de 220 porcinos de aproximadamente 20 a 22 semanas de edad, de apariencia normal, procedentes de 29 granjas tecnificadas del Valle de Lima. El promedio de muestras obtenidas fue de 5 a 10 muestras por granja. El tamaño de la muestra fue obtenida mediante el método de prevalencia límite (Ahlbom, 1990) tomándose como referencia una prevalencia del 10% reportada en USA (Stevenson, 1993) y un nivel de confianza del 99.9%.
b. Detección de anticuerpos. Los anticuerpos fueron detectados a través de la prueba de ELISA empleando un kit comercial (IDEXX) y de acuerdo a las instrucciones descritas en el manual del kit. Los resultados se obtuvieron calculando el coeficiente del valor de la absorvancia de la muestra sobre el valor de la absorvancia del suero control positivo (S/P), de modo que coeficientes S/P inferiores a 0.4 fueron considerados negativos y coeficientes S/P igual o mayor a 0.4 fueron considerados positivos (Manual Herd Check, IDEXX).
Resultados De las 220 muestras de sueros trabajadas, el 13.6 + 4.53% (30/220) fueron reactores al VPRRS. Las muestras positivas a anticuerpos contra el VPRRS provinieron de 5 de las 29 granjas porcinas muestreadas indicando que un 17.3% (5/29) de las granjas estuvieron infectadas con el virus. El total de animales muestreados procedentes de las 5 granjas infectadas fueron 39 (39/220) de los cuales, el 76.9% (30/39) presentaron anticuerpos contra el VPRRS. Se observa también que 12.5 (n=1), 60 (n=1) y el 100% (n=3) de los animales muestreados correspondientes a las 5 granjas infectadas presentaron anticuerpos contra el VPRRS (Cuadro 1).
En la Figura 1 se expresan los diferentes coeficientes o valores S/P (valor de absorvancia de la muestra sobre la absorbancia de la muestra control positivo) encontrados para cada una de las muestras. En la Figura 2 se muestran los rangos entre valores S/P del total de las muestras reactoras al VPRRS.
Discusión La actual distribución mundial del VPRRS, así como la alta incidencia de los problemas respiratorios en lechones y gorrinos de engorde fueron los principales elementos para formular la hipótesis sobre la existencia del VPRRS en la población porcina del país. Los resultados del presente estudio confirmaron la hipótesis. El 13.6% de seroprevalencia del virus en gorrinos de 8 a 22 semanas de edad sin signos clínicos durante la toma de la muestra significa que estos animales estuvieron infectados subclínicamente. Estudios epidemiológicos realizados en diferentes países del mundo donde la enfermedad es enzoótica, muestran seropreva-lencias entre 70 a 100% en gorrinos de 5 a 22 semanas de edad (Wensvoort, 1993; Freese, et al., 1994), en contraste, el 13.6 + 4.53% de animales seropositivos detectados en el presente estudio significa una baja prevalencia. Es posible que la baja densidad de la población porcina nacional sea un impedimento para la rápida y/o masiva difusión viral, pues sólo 5 de las 29 granjas (17.3%) fueron seropositivas. Estudios serológicos realizados en USA durante los años 1985-1989 demostraron que en el denominado cinturón porcino (Iowa, Minnesota), áreas de gran concentración de granjas porcinas, el VPRRS se difundió progresivamente alcanzando una prevalencia de 3.8 a 83.3% (Zimmerman, et al., 1997). La densidad de la población poreina y las distancias entre granja y granja son barreras que impiden la difusión del virus, Christianson (1996) menciona que si las distancias entre las granjas es mayor a 3 km. es muy probable que permanezcan negativas. La presencia de anticuerpos en el 76.9 % de los animales procedentes de las granjas reactoras indican, sin embargo, una alta difusión del virus en las granjas infectadas (Cuadro 1). Los coeficientes S/P de las muestras positivas estuvieron en un rango de 0.4 a 2.39, significando niveles variables y significantes de anticuerpos y una clara evidencia de reciente actividad viral en dichas granjas (Figuras 1 y 2). Estos hallazgos sugieren que el VPRRS podría estar ocasionando problemas respiratorios y/o estar predisponiendo a los gorrinos a infecciones secundarias por Micoplasma, Actinobacillus, Estreptococus, etc.
Estudios epidemiológicos y moleculares sobre el PRRS indican que posterior a los años epizoóticos (1990-1992) la infección fue haciéndose más de tipo subclínico debido a la progresiva aparición de cepas de baja virulencia (Albina, et al., 1994; Stevenson, et al., 1994; Cho, et al., 1993), siendo el rol principal de estas cepas inducir inmunodepresión al destruir los macrófagos alveolares, importante mecanismo de defensa pulmonar. Como inmunodepresor el virus predispone a los animales a infecciones secundarias del tracto respiratorio y/o reproductivo de origen viral o bacteriano y probablemente éste es el efecto principal del virus en las granjas reactoras del país. Recientes estudios experimentales de aislamientos del VPRRS hasta por más de 157 días después de la inoculación, indican que el virus es capaz de persistir en ciertos tejidos del animal por largos períodos luego de la infección inicial, significando que, animales clínicamente normales pueden ser portadores del virus como ocurre con otros arterivirus (Will, et al., 1997, Bilodeu, et al., 1994, Fukunaga, et al., 1994) y que fácilmente pueden ser introducidos a lugares o países libres de la enfermedad a través de la importación de animales portadores. Sin duda fue ésta la forma como el virus ingresó al país con la importación de porcinos de países donde la infección existe, posiblemente al inicio de la presente década, pues preliminares estudios sero-lógicos retrospectivos conducidos en el Laboratorio de Virología de la Facultad de Medicina Veterinaria de la UNMSM, indican la presencia de anticuerpos contra VPRRS en sueros de marranas adultas muestreadas en 1993 (datos no publicados).
Agradecimiento Los autores agradecen al Dr. Raúl Rosadio por sus valiosos comentarios sobre el trabajo.
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