VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA DE LA BRUCELOSIS BOVINA EN LA CUENCA LECHERA DE AREQUIPA E. Paúl Lópezª, Luis Oliverab, Rosa Peralesc y Raúl Rosadioc.
ABSTRACT. The evolution and the situation regarding bovine brucellosis caused by Brucella abortus in the southern Peru is evaluated from 1987 to 1993. All dairy herds in the region of the survey were examined three times using the Milk Ring Test (MRT), and positive and suspect herds recorded. Samples of blood were collected from adult cattle located in the positive herds and analysed using the Plate Aglutination Test (PAT). The results of this epidemiological surveillance program demostrate a decline in the prevalence of the disease. After 7 years of control in the region, it is reported in 1993 that 1.22% (77/6229) of the herds are positive reactors to the MRT and 0.18% (4/2273) of animals to the PAT. No Brucella organism was detected, bya Modified Ziehl-Necisen staining technique, in stomach contents from 142 aborted fetuses (19911993) in the survey population of dairy cattle. This program has resulted in 5 318 herds being declared free of Brucellosis. These receive a 0.5% bonus of the value of the milk sold to the dairy plants. As a result of the low prevalence of bovine brucellosis it is recommended that the program be extended to beef cattle and strict control of the entry of livestock from áreas of Peru, where the disease is endemic, be introduced. These measures will allow in the near future the erradication of brucellosis from southern Peru. Key words: brucellosis, bovine, epidemiology, prevalence
RESUMEN. Se evalúa el estado y evolución de la brucelosis bovina causada por la Brucella abortus en la cuenca lechera de Arequipa, durante 1987 al 1993. El monitoreo se realizó identificando, tres veces por año, a hatos lecheros positivos y sospechosos a la prueba de anillo en leche (PAL) durante los 7 años. Paralelamente, muestras de sangre de toda la población adulta procedente de los hatos positivos a la prueba de selección fueron analizadas para identificar animales infectados mediante la prueba de aglutinación en placa (PAP). Los resultados del programa de vigilancia epidemiológica permiten determinar la disminución en la prevalencia de la enfermedad. Después de 7 años de control de la enfermedad en la región, se ha detectado la existencia, en 1993, de 1.22% (77/ 6,229) de hatos reactores a la PAL y 0.18% (4/2,207) de animales infectados (PAP). No se han detectado Brucella en contenidos estomacales (coloración de Ziehl-Neelsen modificada) de 142 fetos abortados durante 1991-1993. El programa de control de la enfermedad ha permitido identificar en 1993, 5 318 hatos libres de brucelosis, los cuales se han beneficiados con el 0.5% de sobreprecio en el valor de la leche. La baja prevalencia de brucelosis bovina permiten recomendar que para acelerar el programa, la vigilancia debe extenderse hacia el ganado no-lechero, a los que se sacrifican en camales, y fundamentalmente establecer un estricto control en el ingreso de animales procedentes de áreas brucelósicas. Estas medidas permitirán en corto plazo la erradicación de esta enfermedad en la región del sur del país. Palabras claves: brucellosis, bovinos, epidemiología, prevalencia
INTRODUCCIÓN La brucelosis bovina, causada principalmente por la B. abortus, es una enfermedad zoonótica de distribución mundial. La infección en el bovino tiende a localizarse en el útero en gestación, ubres y ganglios linfáticos, persistiendo de por vida en tejido linfoide del animal infectado. La enfermedad causa grandes pérdidas que se estiman en 600 millones de dólares al año solamente en América Latina.1,2 En Perú no existen datos actualizados sobre prevalencia de la brucelosis bovina, pero es una de las principales enfermedades zoonóticas en el país. Los estudios realizados en el año 1967 indican que el 9.5% de 5463 hatos muestreados a nivel nacional se encontraban infectados3 Por otro lado, existen reportes determinando que el 10 % de los quesos consumidos en Lima durante el año 1981 estuvieron infectados con B. abortus biotipo 1, y que el 9% de trabajadores en camales de Lima y alrededores mostraban evidencias serológicas de infección por Brucella.4,5 La cuenca lechera del sur del país es una de las principales abastecedoras de leche en el Perú. Esta región cuenta con una población bovina lechera estimada en 86 200, distribuida en alrededor de 9 500 hatos, que producen un volumen estimado en 600 000 litros diarios. El 75% de esta producción se acopia en las plantas procesadoras de leche y la diferencia se comercializa informalmente. Desde 1987, los ganaderos agrupados en las Fongales Sur, Moquegua y Tacna decidieron establecer un convenio con las autoridades sanitarias del Ministerio de Agricultura de Arequipa, Moquegua y Tacna y el Laboratorio Regional del Sur (LABVETSUR) para iniciar un programa de control y monitoreo de la brucelosis bovina en las cuencas lecheras del sur. El convenio estableció monitorear el estado de la enfermedad inicialmente en muestras de leches procedentes de los productores lecheros. Los animales en edad reproductiva proveniente de hatos positivos a la prueba inicial fueron posteriormente evaluados para detectar anticuerpos específicos mediante pruebas serológicas individuales. El presente reporte evalúa el estado y evolución de la brucelosis bovina causada por la B. abortus durante 7 años (1987-1993) de monitoreos en la cuenca lechera de Arequipa.
MATERIALES Y MÉTODOS El análisis del estado situacional de la brucelosis bovina en la región de Arequipa, se realizó interpretando los resultados provenientes de los monitoreos anuales de un promedio de 6 300 hatos lecheros de la región durante 1987-1993. Al inicio del programa y en vista de que en la región no existía antecedente de uso de vacuna alguna contra infecciones brucelósicas, se realizó una primera evaluación del estado de la enfermedad mediante la prueba de anillo en el 30% (2864/9500) de los hatos existentes en la región.6 Estos resultados preliminares permitieron implementar a partir 1988 se muestre los establecimientos tres veces al año hasta alcanzar progresivamente el 65 % (6229/9500) de los hatos de la región en 1993. Los muestreos de leche se realizaron directamente de los porongos procedentes de los productores al momento de arribo a las plantas receptoras de leche. Estas muestras fueron analizadas para detectar anticuerpos brucelósicos mediante la prueba del anillo en leche. Posteriormente, todos los animales en edad reproductiva (vacas en lactación, secas y vaquillonas) de los hatos positivos a la prueba de anillo fueron sometidos a muestreos de sangre para identificar animales positivos a la prueba de aglutinación en placa y/o Rosa de Bengala. La prueba del anillo en leche fue realizada utilizando antígeno B. abortus coloreado con hematoxilina, proveniente del Central Veterinary Laboratory (Weybridge, Surrey, UK). Para esta prueba se mezcló 1.0 ml de leche fresca con una gota calibrada en 30 m L de antígeno e incubándolo durante 30 minutos a 37 ºC y las reacciones fueron interpretadas de acuerdo a patrones estándares, y las reacciones de antígeno-anticuerpo que permitieron visualizar el anillo de grasa azulado fueron considerados como positivos a la prueba de anillo en leche.7 Todas aquellas muestras que se acidificaban durante el periodo de incubación fueron eliminadas de la prueba y los componentes del hato considerados para muestreos sanguíneos. Toda muestra positiva y sospechosa a la prueba de anillo en leche fueron mantenidas en refrigeración por 24 horas y sometidas a una segunda prueba. La prueba de aglutinación en placa, utilizó como antígeno la cepa 1119-3 coloreado con violeta de genciana y verde brillante, proveniente del Instituto Nacional de Salud (Lima, Perú). Para esta prueba, las muestras de suero fueron distribuidas en la placa mediante pipetas calibradas de Bang y enfrentada con 30 m L, del antígeno.7 La prueba de Rosa de Bengala empleó el antígeno coloreado con rosa de bengala suspendida en buffer, pH 3.6, proveniente del laboratorio veterinario central (Weybridge, Surrey, UK).7,8 Los resultados de las pruebas inmunológicas se interpretaron de acuerdo a las recomendaciones emanadas por la Organización Mundial y Panamericana de la Salud (OMS/ OPS).7-9 Los resultados e interpretaciones de las lecturas de aglutinaciones en placa fueron comparados con las reacciones estándares esperados para bovinos hembras no vacunadas.7,8 Las muestras positivas y sospechosas a la prueba de aglutinación en placa, fueron sometidos posteriormente a la prueba de Rosa de Bangala. Los animales positivos a las pruebas de aglutinación en placa y Rosa de Bengala fueron considerados como animales con presencia de anticuerpos brucelósicos específicos (infectados) y recomendados ser sacrificados. Inicialmente el muestreo fue realizado en la planta lechera Gloria S.A, incluyéndose posteriormente a las plantas de Prolacsur, Laive Arequipa y Tacna y en los últimos años, además, a las plantas procesadoras de quesos que operan en la región. Los contenidos estomacales de los abortos observados (n=142), durante 1991-1993, en los hatos involucrados en el programa de control, fueron utilizados para realizar improntas coloreadas por el método Ziehl-Neelsen modificado para identificar Brucella.9
RESULTADOS Los resultados del monitoreo epidemiológico de la brucelosis bovina en las cuencas lecheras del sur del Perú se muestran en las Cuadros 1-4. Durante los 7 años monitoreados se ha detectado que existe menos del 2% de hatos infectados, y de 1% de animales infectados. El porcentaje de animales positivos a pruebas de aglutinación en placa y de Rosa de Bengala se redujo desde el 1.0% (66/6598) detectado en 1987 hasta alcanzar 0.18% (4/2207) en 1993 (Cuadro 2). Durante el período de estudio se ha podido detectar áreas que mantienen una relativa mayor seroprevalencia en el Departamento de Arequipa, pero en todas estas zonas y/o irrigaciones comprendidas en el estudio la prevalencia ha seguido una tendencia decreciente (Cuadros 2 y 3). El análisis de los datos en los 7 años indican la existencia de 3 áreas consideradas críticas para la persistencia de la infección en la región (Campiña de Arequipa, Pampacolca y San Camilo), en las cuales se lograron detectar a mas de 44 animales seropositivos (Cuadro 3). La disminución de animales infectados en la región se puede visualizar en el año 1993, en el que solo cuatro animales seroreactores fueron identificados en tres irrigaciones lecheras del Departamento de Arequipa (La joya, Irrigación de Majes, y Pampacolca), Cuadro 3. A pesar que se ha procedido a la notificación respectiva para la eliminación de los escasos positivos, las pruebas serológicas han detectado a los mismos animales durante 1 a 2 años, evidenciando pobre efectivización de la recomendación del laboratorio para eliminar vacas positivas. Por otro lado, ya consecuencia de la vigilancia de la brucelosis en la región del sur se ha observado un incremento en el número de hatos negativos a la enfermedad. Para acceder a un estado de libre de brucelosis se exige que los hatos sean negativos a tres pruebas consecutivas de anillo en leche y a una prueba de aglutinación en placa en el lapso de un año. El Cuadro 4, muestra el incremento de los hatos libre de infección desde un 24% (2320/9500) observados en 1987 hasta alcanzar el 56% (5318 /9500) en 1993. Los hatos libres de brucelosis bovina se han beneficiado con una bonificación del 0.5% en el precio de la leche. Bonificación, que en términos financieros representa un monto anual estimado en US$ 320 000. Si se considera solamente los costos indirectos que cuesta mantener el programa de brucelosis en la región se estima que por cada dólar que se invierta en el proyecto el ganadero recibirá ocho en retribución. La disminución. de la prevalencia brucelósica bovina de la región en estudio, se sustenta además con los resultados negativos a la identificación de Brucella en contenidos estomacales de 142 fetos mediante la coloración especial de Ziehl Neelsen durante últimos 3 años. El 49% de estos abortos fueron consecuencia de infecciones por el virus de rinotraquetis infecciosa bovina y/o virus de la diarrea viral bovina.10
ªCon excepción 1987
(un muestreo), el muestreo de hatos fue realizado 3 veces al año
NM= no muestreado
DISCUSIÓN El Perú cuenta con un reglamento oficial para el control y erradicación de la brucelosis bovina desde 1985. Sin embargo, el reglamento está desactualizado y no contempla métodos y reglamentaciones adecuadas para la lucha contra esta enfermedad. En este contexto, en el intento de controlar la brucelosis bovina en las cuencas lecheras del sur se tuvo que establecer el convenio LABVETSUR y los gremios de ganaderos optándose por utilizar la prueba del anillo en leche conjuntamente con pruebas de aglutinaciones en placa en sangre como pruebas de selección y de confirmación respectivamente. La opción para el uso de las pruebas de aglutinación en placa y la de Rosa de Bengala se basó en la eventualidad que la combinación de ambas pruebas podría aumentar la sensibilidad en la detección de animales infectados. Aunque existe cierto debate sobre la sensibilidad de la prueba de aglutinación en placa, esta prueba todavía es considerada como una de la más adecuada para el diagnóstico de la brucelosis.11 La prueba Rosa de Bengala es más específica, pues detecta menores cantidades de antígeno bacterial.11 Por otro lado, la elección de estas pruebas fueron consideradas teniendo como antecedente el no uso de vacuna alguna contra la brucelosis bovina en la región. Además, el muestreo preliminar de 1987, determinó que menos del 1% de hatos lecheros muestreados (n=2 864) reaccionaron positiva y sospechosamente a la prueba de anillo en leche. Por otro lado, solo el 1% de animales muestreados (n=6 598) reaccionaron a la prueba de aglutinación en placa (Cuadros 1 y 2). El análisis de los resultados permiten determinar que la prevalencia de la brucelosis bovina en la región del sur es baja, corroborando similares resultados encontrados en el Departamento de Arequipa.12,13 El permanente monitoreo regional, utilizando pruebas de selección y confirmación, permiten indicar la existencia de localidades y/o irrigaciones del sur del Perú con reducidas tasas de prevalencia para la brucelosis bovina. Las pruebas de anillo en leche determinan que sólo el 0.45% y 1.39% de los establecimientos lecheros se encontraron infectados en 1987 y 1993, respectivamente. Asimismo, durante estos mismos años se ha observado una reducción de animales seropositivos a la prueba de aglutinación en placa del 1.0% (1987) al 0.18% (1993). La notoria reducción de la prevalencia es evidente el 1993, en donde los 4 animales seropositivos a la prueba de aglutinación en placa fueron procedentes de tres irrigaciones del departamento de Arequipa (Cuadro 3). La campaña de control de la brucelosis bovina en la región del sur del país se realiza utilizando conjuntamente pruebas de anillo en leche, aglutinación en placa y Rosa de Bengala. El uso de la prueba de anillo en leche como prueba de selección se basa en la habilidad de identificar hatos potencialmente infectados detectando anticuerpos brucelósicos en la leche. Esta prueba es práctica, barata, y permite examinar hatos lecheros con relativa frecuencia tan necesarios en programas de control de brucelosis. La utilidad de esta prueba ha sido ampliamente comprobada en países que han logrado erradicar brucelosis bovina.7,14 Sin embargo, la interpretación de los resultados de esta prueba en el presente programa consideró factores que pueden afectar las reacciones y dar falsos positivos. Para disminuir los falsos positivos, en el laboratorio se evitó realizar pruebas en leches ácidas, de reciente obtención, as¡ como muestras procedentes de ubres mistíticas y los con presencia de calostro, y sobre todo leche de vacas en proceso "de secado".7,9 Por otro lado, la práctica de reprueba a toda muestra positiva, después de refrigerarlas por 24 horas, eliminó a las reacciones inespecificas y confirmó resultados positivos en el alrededor de 70 % (datos no presentados). Durante los años observados, la prevalencia de la enfermedad ha disminuido hasta alcanzar tasas menores del 2% de los rebaños y a menos del 1% del ganado. Las tasas encontradas son reducidas y sobre todo alentadoras para dar ¡nido a un programa de control oficial tendiente a la erradicación de la enfermedad en la región. Sin embargo, para acelerar el programa el sistema de vigilancia deberá extenderse al ganado bovino de carne y a los animales que se comercializan o sean destinados a camales. Por otro lado, se debe propiciar trabajo colaborativo entre varias instituciones ejecutoras de diagnósticos a fin de contar con pruebas diferenciales y de confirmación como las pruebas de fijación del complemento y/o seguir apoyando el proyecto de estandanzación de la prueba ELISA a cargo de la Facultad de Medicina Veterinaria de Universidad de San Marcos y el Instituto Nacional de Salud del Ministerio de Salud. Paralelamente el estado, a la brevedad posible, debe implementar las certificaciones oficiales para declarar primero hatos y posteriormente áreas libres de brucelosis bovina. Este esquema necesitará, fundamentalmente el apoyo del ganadero, pero sobre todo la ayuda del Estado para proceder a la obligación en eliminar los animales positivos y en lo posible buscar indenmización a los ganaderos en donde se registren infecciones persistentes y que no respondan a la administración de los procedimientos de prueba y eliminación de animales positivos. Este instrumento ha sido empleado con eficacia en países con zonas de baja incidencia similares a la región del sur del Perú.14,15 Las autoridades deben tener en cuenta que los ganaderos de la Región del sur, desde 1987, han invertido en el programa de control de brucelosis más de US$ 270 000. Esta inversión tiene que protegerse para lograr a la brevedad posible erradicar la enfermedad de la región del sur del Perú. De mantenerse la baja prevalencia en la región, los ganaderos y las instituciones pecuarias tendrán que seguir apoyando al programa y exigir se implemente una estricta vigilancia epidemiológica a través de garitas de control y severa cuarentena de animales procedentes de áreas brucelósicas. El programa debe contemplar la obligatoriedad de reportar y enviar todo aborto que se presente en los hatos bajo control. Esta medida tendrá que complementarse con usos de cultivos bacteriológicos para el descarte de Brucella en el laboratorio. Por otro lado, a medida que se extienda los hatos libres de la enfermedad, se tendrá que implementar el uso de pruebas diagnósticas de mayor sensibilidad y especificidad tales como prueba de fijación del complemento y/ o ELISA a fin de principalmente disminuir las reacciones falsos negativos y falso positivos. Las experiencias del programa iniciado en las cuencas lecheras del sur del Perú deben ser consideradas como programa piloto e incentivar el establecimiento de similares programas en valles interandinos y eventualmente a nivel nacional. Para iniciar este ansiado programa en el Perú, se tendrá que modificar el actual reglamento del programa de control y erradicación de la brucelosis bovina. Este reglamento deberá considerar especialmente la existencia de valles interandinos con infecciones brucelósicas menores del 2%, así como determinar métodos de diagnósticos eficaces y fundamentalmente deberá designar las pruebas estándares de referencia para el país.
AGRADECIMIENTO El programa de control de la brucelosis iniciado en el sur del país ha sido gracias a la colaboración de los ganaderos, a la Dirección Regional de Agricultura, otras instituciones pecuarias y sobre todo a los profesionales y técnicos de LABVETSUR. El programa fue iniciado gracias a la Cooperación Técnica Internacional del Ministerio de Desarrollo Ultramar del Gobierno Británico, y a su primer Asesor y Gerente Dr. Roger Windsor.
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