RESUMEN

Antecedentes: La resistencia a rifampicina en M. tuberculosis involucra mutaciones en el gen rpoB que codifica a la sub unidad B de la ARN polimerasa. El Polimorfismo en la Longitud de los Fragmentos de Restricción utilizando la secuencia de 1,361 pares de bases (pb) IS6110 (RFLP-IS6110) es un método de genotipaje para diferenciar los polimorfismos entre una cepa y otra de M. tuberculosis.

Objetivo: 1. Identificar las mutaciones del gen rpoB, en cepas de M. tuberculosis aisladas de la Sub-Región de Salud Lima Norte. 2. Genotipificar las cepas resistentes a rifampicina por una huella dactilar (fingerprint) del ADN producido por la hibridación de una sonda de 245 pb obtenida de la secuencia de inserción IS6110.

Método: Se cultivó en Lowestein-Jenseen 73 muestras de esputo de pacientes con TBC pulmonar. A 62, con más de 10 colonias por tubo, se les hizo susceptibilidad a: isoniazida, rifampicina, estreptomicina y etambutol. Se hizo la extracción de ADN, PCR, clonación en el vector pGEM-T, transformación, selección de clonas recombinantes y secuenciamiento del ADN plasmídico para la determinación de los polimorfismos del gen rpoB. Para el RFLP-IS6110 se hizo la digestión con Pvull, PCR, transferencia de ácidos nucleicos, hibridación y detección del IS6110.

Resultados: 52 (83.9%) cepas fueron resistentes a rifampicina (Rif r) y 10 (16.1%) susceptibles (Rif5). Se encontró alteraciones en el gen rpoB en 51 de las 52 cepas Rif s. Se identificaron 20 mutaciones. Las mutaciones más frecuentes fueron encontradas en los codones Ser-531 (62.7%), His-526 (15.72%), Asp-516 (11.78%) y Gln-513 (5.88%). No se observó mutación alguna en diez cepas susceptible a rifampicina 94.2% de nuestras cepas Rif r fueron también resistentes a isoniazida. Se observaron 25 patrones diferentes de RFLP-IS6110 en las 27 cepas Rif r analizadas. Cuatro de ellas presentaron dos patrones idénticos y 23 tuvieron patrones diferentes entre sí.

Conclusiones: 1 . Mutaciones en el gen rpoB están presentes en casi todas las cepas Rif r 2. Casi todas las cepas Rif r son también resistentes a isoniazida. 3. La presencia de cepas Rif r no se debe a la transmisión en la comunidad de una única cepa resistente.

Palabras claves: M. tuberculosis, gen rpoB, rifampicina resistente.