| Ciencia e Investigación
Vol. 5 • Nº 1 • 2002 |
|
DETERMINACIÓN DE LA VIABILIDAD DE Vibrio cholerae O1 EN
LOS MEDIOS DE TRANSPORTE AMIES Y STUART
Ana Cevallos M, A Guillén, Gerardo
Gamarra B, Mirtha Roque A.
RESUMEN
Se analizó el tiempo de permanencia de Vibrio cholerae O1 en los medios de transporte
Amies, Amies con carbón y Stuart. Las heces diarreicas de trece pacientes con síntomas
clínicos de cólera fueron recolectadas en dichos medios incluyendo el medio Cary-Blair.
Luego de realizar los coprocultivos quincenales de cada muestra, V. cholerae O1 fue
aislado hasta el día 30 en el medio Stuart (p = 1.00), hasta el día 45 en el medio
Cary-Blair (p = 0.0956) y hasta el día 60 en el medio Amies con Carbón (p.0.1992). Estos
resultados indican que V. cholerae 01 puede ser transportado en los medios evaluados,
excepto en el medio Amies. En los restantes medios, V. cholerae ha sido recuperado bajo su
forma viable y cultivable durante el periodo de estudio.
Palabras claves: Vibrio cholerae O1, medios de transporte, viabilidad.
SUMMARY
It was studied the time of permanence of Vibrio cholerae 01 in the transport media Amies,
Amies with charcon and Stuart. Thus, the faecal samples of thirteen cholera patients were
collected and transported in those media included Cary-Blair medium. Through the fortnight
cultures of each sample, V. cholerae 01 was isolated as follow: during the firsts 30 days
in Stuart medium (p = 1.00). During 45 days Cary-Blair medium (p = 0.095) and during 60
days in Amies with charcoal medium (p=0.199). Results indicate that V cholerae 01 could be
transported in all the media evaluated, except in Amies medium. In those media V. cholerae
01 has recovered under its culturable and viable form during the study time.
Key words: Vibrio cholerae O1, transport media, viability.
|
INTRODUCCIÓN
Vibrio cholerae, agente casual de la enfermedad del cólera es una bacteria gram-negativa
que se adapta a los medios acuáticos, donde prolifera cuando ciertos factores ambientales
le son favorables, pudiendo ser transmitidos hacia la población humana, ocasionando focos
infecciosos según un patrón estacional (6,14). El cólera persiste en algunas regiones
naturales del Perú, donde V. cholerae Biotipo El Tor se adaptaría debido a sus
características endémicas.
Cuando aparecen casos sospechosos de cólera, el agente infeccioso es identificado
mediante el coprocultivo de la muestra fecal la cual debe ser adecuadamente obtenida y
trasportada hacia un laboratorio referencial (9). El transporte de una muestra. fecal
desde una zona rural hasta un laboratorio referencial puede tardar hasta dos semanas (12).
De acuerdo a los manuales de identificación la muestra diarreica debe ser transportada
solo en el medio Cary Blair (11, 15). En el presente estudio se plantea la posibilidad de
usar estudio otros medios, donde se asegure la viabilidad de Vibrio cholerae durante el
tiempo de transporte y de donde la bacteria pueda ser recuperada mediante coprocultivo.
La viabilidad de la bacteria permitirá identificar el posible primer caso de cólera que
determinara a su vez la ubicación del foco infeccioso donde se podrán implementar las
medidas de control y la provisión de asistencia oportuna (8).
MATERIALES Y MÉTODOS
Se colectaron las muestras de trece pacientes con síntomas de cólera atendidos en el
Hospital María Auxiliadora, Lima. Cada hisopo con muestra fue depositado en los medios de
transporte: Cary-Blair, Amies con carbón, Amies sin carbón y Stuart y fueron llevados al
laboratorio a temperatura AMBIENTE. La muestra de cada paciente se obtuvo por duplicado
para cada medio de transporte (Gráfico 1). Las muestras contenidas en cada medio de
transporte fueron conservadas a temperatura ambiente (25°C) durante el estudio. El
coprocultivo se realizó según los métodos descritos (11, 15).
El tiempo de permanecía de la bacteria se analizó mediante la prueba exacta de Fisher
(26) y se utilizó el paquete estadístico Epiinfo (25). Dicho análisis permitió
comparar la proporción de muestras positivas a V. cholerae en el primer día y la
proporción de muestras positivas a V. cholerae en cada una de las siguientes quincenas
posteriores. La prueba fue aplicada para cada medio de transporte evaluado, según la
construcción de las tablas de contingencia para ada caso.
Gráfico 1. Coprocultivos
quincenales (11,15)
|
|
RESULTADOS
La evaluación quincenal de las trece muestras en cada medio de transporte,
microbiológico fue el siguiente:
Medio de Transporte Amies sin Carbón. -El valor "p" de la probabilidad, según
la prueba de Fisher para la comparación entre la proporción de bacterias recuperadas en
el primer día y la proporción de bacterias recuperadas en las siguientes quincenas,
indico que dichas proporciones siempre fueron diferentes (p < = 0.0052). Medio de
Transporte Amies con Carbón. -El valor "p" de la probabilidad, según la prueba
de Fisher para comparar la proporción de bacteria recuperada en el primer día y la
proporción de bacteria recuperada en las siguientes quincenas, indicó que dichas
proporciones fueron iguales desde la primera hasta la cuarta quincena (p = 0.1992),
después de este tiempo, las proporciones siguientes no fueron iguales a la proporción
obtenida en el primer día (p<=0.0391).
Medio de Transporte Cary-Blair. El valor "p"' de la probabilidad, según la
prueba de Fisher para la comparación entre proporción de bacteria recuperada de las
muestras en el primer día y la proporción de bacteria recuperada en las siguientes
quincenas, indicó que dichas proporciones fueron iguales de la primera hasta la tercera
quincena (P > = 0.0956). Las proporciones siguientes no fueron iguales a la proporción
obtenida en el primer (p < = 0.0149).
Medio de Transporte Stuart. El valor 14 p" de la probabilidad, según la prueba de
Fisher para la comparación entre la proporción de bacteria recuperada de las muestras en
el primer día y proporción de bacteria recuperada de las muestras de la siguientes
quincenas, indicó que dichas proporciones fueron iguales hasta la segunda quincena ó 30
días (p = 1.000), después de este tiempo, las proporciones no fueron iguales a la
proporción obtenida en el primer día (p < =0.0149).
Gráfico 2 Tiempo de supervivencia de Vibrio Cholerae en los medios de
transporte evaluados según la prueba de Fisher
|
 |
DISCUSIÓN
V. cholerae fue aislado del medio Amies sin carbón en el primer coprocultivo pero su
recuperación luego de quince días no es estadísticamente aceptable. Es posible que V.
choterae haya adoptado su estado viable no cultivable, el cual no es útil para el
oportuno diagnostico clínico del cólera (3, 18). Por lo contrario, V. cholerae fue
recuperado en el medio Amies con carbón durante sesenta días. Dicha persistencia puede
deberse a la presencia del carbón que tiene afinidad por sus compuestos orgánicos (7),
descomponiendo las formas reducidas de oxigeno y secuestrando los radicales libres (10);
sin embargo, el carbón dificulta las tinciones gram.
La recuperación de V. cholerae en el medio Stuart disminuye drásticamente después de
treinta días. Se ha descrito que el medio Stuart permite el transporte de especimenes
fecales debido a la presencia de una solución balanceada de sales y un amortiguador de
fosfato orgánico (4). Es posible que la disminución de la concentración de oxigeno
debido a la presencia de tioglicolato de sodio, la ausencia de cloruro de sodio y la menor
Stuart (2) hayan afectado a la recuperación cultivable y viable de V. Cholerae. Los iones
sodio son necesarios para la supervivencia y el desarrollo de V. cholerae (20) y la
combinación de bajas concentraciones de salinidad-nutrientes afecta la recuperación de
éste, logrando detectar sólo bacterias no cultivables(19).
En el medio Cary-Blair, V. cholerae tuvo un comportamiento inicial similar a los medios
Stuart y Amies con carbón, manteniéndose constante hasta los treinta días, resultado
reportado anteriormente (13). El medio Cary-Blair es recomendable para el transporte de V.
cholerae debido a su pH alcalino (pH = 8.4) y a la presencia de cloruro de sodio (5, 13,
15, 21); pero, V. cholerae también se establece a pH neutro como ocurre en el ambiente y
como se ha podido demostrar en el presente estudio con los medios Amies con carbón
Stuart, que han sido recomendados para el transporte de las muestras, pero sólo por
periodos de breves (uno o dos días), dado que aparentemente el pH de estos medios no era
óptimo para V. cholerae (15).
Es posible que en todos los medios de transporte utilizados, V. cholerae haya sufrido
alteraciones fisiológicas debido al prolongado tiempo de exposición. Sin embargo, la
mayoría de medios utilizados a excepción del medio Amies, han sido apropiados para
mantener V. cholerae viable y cultivable durante 30n días como mínimo, (probablidad >
0.05). Es posible que estos medios de transporte puedan también mantener cultivos puros
de la bacteria, pudiendo ser usados en ceparios.
Medios de transporte para Vibrio cholerae
Se ha logrado demostrar la permanencia de Vibrio cholerae O1, Biotipo El Tor en los medios
de transporte Amies (Gráfico 2).
Las muestras fecales de pacientes con síntomas clínicos de cólera podrían ser
eventualmente transportadas en los medios de transporte Amies con carbón y Stuart, cuando
no se dispone del medio de transporte Cary-Blair. Las muestras así transportadas
permitirán identificar al agente casual, reportar la enfermedad e implementar las medidas
de control (8).
El tratamiento del cólera ha sido eficiente en el Perú dado que se conocían los
programas de control de las enfermedades diarreicas antes del primer brote de cólera
(17). La prevención y control del cólera requiere del abastecimiento del agua segura y
la detección inmediata del primer caso (24). Por ello, siempre será importante rescatar
las muestras biológicas de los primeros casos que permitan identificar al agente
infeccioso.
La notificación de brotes epidémicos de cólera causados por Vibrio cholerae O139,
distinto del serogrupo O1, ha alertado al Perú y a muchos países propensos a desarrollar
esta nueva epidemia. La identificación de V. cholerae 0139 es similar a la de V. cholerae
O1; por ello los métodos se aplican por igual, incluyendo su transporte (1, 15, 16, 22,
23).
CONCLUSIONES
1. Vibrio cholerae O1 permanece viable y cultivable durante sesenta días en el medio de
transporte Amies con carbón, durante cuarenta y cinco días en el medio transporte Cary
Blair y durante treinta días en el medio de transporte Stuart.
2. Los coprocultivos de las muestras transportadas por los medios evaluados deberán ser
preenriquecidos en agua peptonada alcalina para asegurar la viabilidad de la bacteria.
3. Vibrio cholerae 01 permanece viable y cultivable en el sistema de transporte Amies
durante cuarenta y cinco días y en el sistema de transporte Cary-Blair durante treinta
días, a pesar de haberse empleado productos vencidos.
Bibliografía
|
