Bazalar V. Dolores; Choquesillo P. Fritz; Milla F. Hugo; Herrera C Oswaldo; Félix V. Miguel
RESUMEN Diversos estudios sobre la acción inhibitoria de crecimiento de¡ extracto acuoso exento de alcaloides de Erythroxilum novogranatense (Morrys) var. truxillense (Rusby), frente a diversas cepas de bacterias, hongos, bacterias cariogénicas y cepas ATCC, hemos reportado anteriormente. Estudios anteriores sobré Plantago major L "Llantén", reportan componentes químicos como: glicósidos, aucubinas, flavonoides, terpenos, taninos, resinas, ácidos orgánicos, minerales, vitaminas y otros elementos. Se realizó las determinaciones fitoquímicas en muestras de ambas especies, los extractos acuosos fueron esterilizados separadamente mediante filtros de Millipore, para realizar las determinaciones de acción inhibitoria de crecimiento frente a bacterias y hongos. La proporción de la asociación de los dos extractos acuosos empleados fue de 50150, como óptimo para nuestro estudio. Se emplearon 63 cepas de bacterias multiresistentes a antimicrobianos y cepas ATCC, hongos anemófilos y dermatofitos. Los métodos empleados fueron: turbidimétrico para bacterias y de difusión en placa para hongos en medios específicos. Por los resultados obtenidos se demuestra que, la asociación de ambos extractos presentaron sinergismo, comparada con el estudio realizado por separado de cada uno de los extractos.
INTRODUCCIÓN Actualmente a nivel mundial y en los países en vías de desarrollo, se están realizando estudios sobre diferentes especies de plantas consideradas como medicinales, ya que son empleadas en la medicina tradicional, por los diferentes efectos terapéuticos que se les atribuyen. La composición química de las hojas de las especies estudiadas: Erythroxilum novogranatense (MORRYS) var. truxillense (RUSBY) "Hoja de coca de Trujillo", no es uniforme, dependiendo de los factores geográficos, ecológicos, forma de cultivo y edad de las plantaciones. Se han reportado investigaciones sobre la composición química, demostrando la presencia de: elementos inorgánicos, vitaminas carbohidratos, flavonoides y alcaloides atribuyéndoseles propiedades antiinflamatorias, cicatrizantes, astringentes, vasodilatadoras, cte. Estudios reportados sobre Plantago major L. "llanten", han demostrado el uso de hojas, semillas, raíz, o de la planta total. Como componentes químicos: el glucósido, aucubina, proteínas, carbohidratos, minerales, vitaminas, flavonoides, terpenos, taninos, ácido cítrico, ácido oxálico, grasas, resinas, ceras y otros elementos. En nuestro país, se encuentra difundido su uso como antiinflamatoria y cicatrizante sobre la piel y mucosas y también en traumatismos. Investigaciones que hemos reportado a partir de 1993 a la fecha, empleando el extracto acuoso de principios acivos totales exento de alcaloides de la especie de la hoja de coca en las concentraciones de 800 m g/ml y 1000 m g/ml. Presentaron acción inhibitoria de crecimiento frente a cepas multiresistentes a diversos antibacterianos como Escherichia coli Staphylococcus aureus, S. epidermidis, Streptococcus viridans var. mitis, mutans y salivarius. Estos últimos aislados de procesos cariogénicos. Disminución de crecimiento micobacterium tuberculosis; obtención de colonias pequeñas y pérdida de pigmentación de hongos considerados como anemófilos. En la presente investigación, se trata de determinar la acción inhibitoria de crecimiento de la asociación de extractos acuosos de ambas especies 50: 50 de Erythroxilum novogranatense (Morris) var. truxiliense (Rusby) y de Plantago major L. frente a bacterias Gram positivas, Gram negativas, hongos anemófilos y hongos dermatofitos.
MATERIAL Y MÉTODOS Las hojas de Erythroxilum novogranatense (Morris) var. truxillense (Rusby) fueron seleccionadas según criterios establecidos, trituradas y sometidas a maceración con metanol GR durante 7 días, posteriormente la muestra se concentró a presión reducida y tratada por métodos específicos para eliminar la clorofila y los alcaloides. Posteriormente se realizó el screening fitoquímico y las pruebas de identificación correspondientes. Las hojas de Plantago major L. fueron seleccionadas, lavadas y secadas en estufa de aire circulante a temperatura de 40 a 60'C, durante 3 a 4 días. La muestra fue reducida a fragmentos pequeños, 20 g de muestra fue adicionada a 200 ml de agua destilada y sometida a baño maría entre 40 a 60º C por 4 horas, se filtró y concentró a sequedad. Ambos extractos fueron esterilizados al vacío a través de embudo de filtración de polisulfona para filtro de 47 mm. Membrana Sterilized Gelman Sciences 0,45 m m, Bomba de vacío 23-25 Pg. Hg y filtro protector Vacushield. Las muestras obtenidas fueron colocadas en matraces estériles para realizar las diluciones correspondientes. Se emplearon en la presente investigación 63 cepas que correspondieron a bacterias Gram positivas y Gram negativas con multiresistencia a antimicrobianos, hongos anemófilos y hongos dematofitos aisladas de diferentes especímenes patológicos, así como cepas ATCC. Así como medios de cultivo específicos para el aislamiento y diferenciación bioquímica entre otros: medio fluido de tioglicolato, Mitis Salivarius agar, Brain Heart Infusion, Brain Heart infusión agar, para determinar la acción inhibitoria de la asociación de los extractos. Se emplearon los métodos: turbidimétrico y de difusión en placa, incubando los medios sembrados a 37º C por 24 y 48 horas para bacterias y de 25º C por 5 a 7 días para hongos.
RESULTADOS De las 17 cepas de bacterias gram negativas estudiadas: 6 presentaron inhibición de crecimiento, correspondiendo 3 cepas a E. Coli, 1 cepa a Salmonella typhi y 2 cepas a Serratia marcences. De las 10 cepas de Staphylococcus se reportó el siguiente resultado: 3 cepas de S. Aerus y 5 cepas de Sepirdemidis presentaron inhibición de crecimiento. De las 20 cepas de Streptococcus viridans aisladas de procesos cariogénicos, 4 cepas de S. Mitior, 2 cepas de S. Milleri y 2 cepas de S. Salivarius presentaron inhibición de crecimiento; en el caso de las 2 cepas de Veillonella, no se observó inhibición, las 2 cepas de Actinomyces presentaron inhibición de crecimiento.
De las 7 cepas de hongos enemófilos presentaron inhibición de crecimiento cepa de penicillium spp., Asperhillud clavatus, Alternaria, Homodendrum y Mucor. Las cepas de hongos dermatofitos: Epidermophytum floccosum, Microsporum gypsium, Microsporum canis, Trichophytum rubrum y T. Mentagrophytum, presentaron disminución del crecimiento en cuanto al tamaño de las colonias, así como modificaciones en sus características culturales, los resultados se reportan en los cuadros respectivos. Las cepas ATCC, Staphylococcus aureus ATCC 6538, presentaron inhibición de crecimiento.
DISCUSIÓN La acción inhibitoria de crecimiento observada en cada una de las cepas estudiadas nos demuestran que ambos extractosacuosos empleados en forma asociada, presentan una ación de sinergismo, comparándola con el estudio realizado por separado en ambos casos. Debemos de tener en cuenta que es importante la acción antiintegrante que ejercen sobre las bacterias cariogénicas ya que éstas presentan entre otros el factor coagregante para fijarse sobre la placa dental. Así mismo es importante, resaltar la obtención de colonias sin tratamiento, así como la pérdida de la pigmentación propia de cada especie.
BIBLIOGRAFÍA Buniato O. A., Lajubutu, Ba. Antimicrobial potentials of some plants species of the Bignoniaceae family. Afr. Med. Sci. 1994 sep-23 (3): 263-73.Bazalar V.D., Alcántara L.D., León S.E. Acción inhibitoria de extractos acuoso y metanólico exento de alcalides de Erythroxilum novogranatense (Morris) var. Truxillense RUSBY, frente a uropatógenos gram negativos. Act. II Encuentro iberoamericano sobre las ciencias Farmacéuticas y alimentarias. La Habana, Cuba 1996. Carreño, M. Efecto cicatrizante de Plantago major (llantén). Trabajo de aptitud profesional para optar el título de químico Farmacéutico. UNMSM. Lima-Perú. Gilvonio, G.C. Aislamiento, elucidación estructural y comprobación de las propiedades antibacterianas de los glicósidos de Plantago major L. Trabajo de aptitud profesional para optar el título de químico Farmacéutico. UNMSM. 1989. Grabor, M. Plant flavonoids in biology and medicine II. Biochemical celular and medicinal properties. 1988. Pp 1-15 alan R. Liss, Ins. Quality Control Methods for medicinal plant materials. 1992. Wo-Pharm 559. Scheie A. Mechanisms of dental plaque formation. Adv. Dent. 1994 Jul. 8(2): 246-53.
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