CAPACIDAD ANTIOXIDANTE EN RATAS DIABÉTICAS ROL
DE LA VITAMINA E

R. Oré, R. Valdivieso y D. Huerta *

INTRODUCCIÓN

La diabetes mellitus agrupa un conjunto de enfermedades metabólicas caracterizadas por la hiperglicemia producida por falta de secreción de insulina, falta de acción de esta hormona o ambos mecanismos. Como consecuencia de la hiperglicemia crónica, se observa disfunción y lesión en diversos órganos, especialmente en ojos, riñón, nervios, corazón y vasos, complicaciones que producen una importante alteración del estado de bienestar y una disminución de la esperanza de vida (Gonzáles et al., 1998 y Jam et al., 1997).

Cada vez existen más evidencias que niveles altos de glucosa sanguínea favorecen la glicosilación no enzimática de las proteínas tisulares de larga duración, enzimas e incluso DNA (Daudona et al., 1996); una de las proteínas que sufren esta glicosilación es la HbA1c; esta hemoglobina sufre una serie de lentas redisposiciones químicas originando productos finales de glicosilación avanzada (PFGA), que suelen acumularse y que estarían involucrados en la generación de Radicales Especies Reactivas derivadas del oxígeno (ROS).

Estos radicales pueden atacar los dobles enlaces de los ácidos grasos poliinsaturados induciendo la lipoperoxidación, el cual puede producir un mayor daño celular oxidativo. Tales daños pueden ser prevenidos o moderados por un sistema antioxidante, que recogerían ROS.

Un sistema antioxidante depende primero de la presencia de elementos trazas como selenio, cobre, zinc y magnesio; segundo, de una adecuada concentración de vitamina E, C y Beta caroteno en el citoplasma y lípidos de la membrana de las células (Karasu et al.,1997), Mulifirkey et al., 1990 y Staht et al.1997). Debe señalarse que es muy difícil medir, in vivo, los niveles de radicales libres debido a su vida media corta, su gran reactividad y su baja concentración (Calderón, 2000). Así la medición de lipoperoxidación es un buen marcador para determinar el daño oxidativo de la célula, para lo cual se usan mediciones indirectas, tales como la formación de un complejo coloreado de TBA-MALONDIALDEHIDO (MDA).

El propósito del presente trabajo fue demostrar el rol antioxidante de la vitamina E administrada a ratas diabéticas, y observar si mejora sus defensas antioxidantes y su glicemia.

MATERIAL Y MÉTODOS

a. Material biológico

Se usaron 24 ratas machos Sprague-Dowley de un peso aproximado de 200-250 g, los cuales fueron colocados en jaulas individuales. Las condiciones ambientales fueron: temperatura promedio 22-25 oC y una humedad del 75% con un fotoperíodo de 12 horas.

Todos los animales fueron adquiridos del Instituto Nacional de Salud.

Los animales de experimentación fueron divididos en 4 grupos según dieta (6 ratas por grupo): I: Dieta control, II: Dieta control + vitamina E (900 mg/kg de dieta), III: Diabético, IV: Diabético + vitamina E.

Los animales recibieron una dieta isocalórica (433 Kcal) y agua ad libitum durante el experimento.

b. Método analítico

1. INDUCCIÓN DE DIABETES EXPERIMENTAL. Se produjo un estado diabético en ratas, en ayunas por administración intraperitoneal (ip) de estreptozotocina (SZT) de 35 mg/kg de peso, la cual fue disuelta en baffer citrato pH 4,5 y utilizada dentro de los 10 minutos de su preparación (Karasu et al., 1997).

Después de 8 semanas de tratamiento con insulina (4 U/kg de peso) por vía subcutánea, se consiguió un control metabólico mas o menos estable en grupos diabéticos y en el que recibió vitamina E (25 mg/día).

2. DETERMINACIÓN ENZIMÁTICA DE GLUCOSA. Se usó el método espectrofotométrico de glucosa oxidasa-peroxidasa y las lecturas se realizaron a una longitud de onda 505 nm en el espectrofotómetro LKB asociado a una computadora ( Valtek, 1998).

3. DETERMINACIÓN DE GLUCOSA USANDO EL REFLOLUX. La glicemia se determinó en sangre total, tornado directamente de la cola. La gota de sangre se colocó en la tira reactiva de hemoglucotest y seguidamente se usó el equipo Reflolux de Boenringer.

4. DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA GLICOSILADA (HBA1c). Método de Cromatografía en columna de intercambio iónico; las lecturas fueron hechas a 415 nm (Biosystems, 1985).
Después de preparar un hemolizado, donde se elimina la fracción lábil, las hemoglobinas son retenidas por un resina de intercambio catiónico, eluyéndose de forma específica la hemoglobina A1c (HbA1c) previa eliminación por lavado de la Hba+b. La estimación del porcentaje de la HbA1c se realiza por lectura de la absorción a 415 nm.

5. DETERMINACIÓN DE ANTIOXIDANTES TOTALES. Método Espectrofotométrico midiendo el radical catión ABTS+ (2,2'-Azino_di[3-etilbenotiazolin Sulfanato]). Este radical desarrolló un color verde azulado, midiéndose a 600 nm (Randox, 1998).

6. DETERMINACIÓN DE MALONDIALDEHIDO (MDA). Se determinó en suero fresco y según el método de Buege con algunas modificaciones (Suárez, 1995).

7. DETERMINACIÓN DE ALBÚMINA Y PROTEÍNAS TOTALES. Se analizaron las muestras en el espectrofotómetro previa reacción con los reactivos de verde de Bromocresol para la albúmina y el Método de Biuret para las proteínas (Valtek, 1998).

8. ANÁLISIS ESTADÍSTICO. Se reportaron los valores estadísticos como media, desviación estándar y la prueba significativa student para la diferencia de medias (Moya, 1988)

RESULTADOS

En la Tabla 1 presentamos los niveles de glicemia y de hemoglobina glicosilada (HbA1c) en las ratas según los grupos de tratamiento. Se observa una disminución en los grupos que recibieron el suplemento vitamínico al compararlos con sus respectivos grupos (control y diabético).

En el caso de la hemoglobina glicosilada (HbA1c) existe diferencia significativa (p < 0,05) al comparar los grupos diabéticos.

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