| Rev. Peru. Biol.
Vol. 7 • Nº 1 • 2000 |
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EVALUACIÓN TOXICOLÓGICA
PRELIMINAR DE RUTA GRAVEOLENS, ORIGANUM
VULGARE Y PERSEA AMERICANA SOBRE EMBRIONES
PREIMPLANTACIONALES DE RATÓN
V. Benavides, G. Trujillo, G. D'Arrigo, U.
Paredes y J. Pino
RESUMEN
El creciente interés por la medicina natural hace necesaria la evaluación de las
propiedades de las plantas, así como de sus posibles efectos secundarios. En años
recientes se han reportado los efectos tóxicos de varias plantas medicinales sobre el
desarrollo preimplantacional de ratón (Benavides et al, 1998; Benavides et al., 1999),
muchas de las cuales producen malformaciones y alteraciones en el desarrollo embrionario. Ruta
graveolens "ruda", Origanum vulgare "orégano" y Persea
americana "palta" son usadas folklóricamente para aliviar cólicos
menstruales y como abortivos (Estrella, 1995). El objetivo del presente trabajo es evaluar
in vivo el efecto del extracto acuoso de orégano, ruda y palta al 20% sobre la
morfología y el desarrollo de embriones preimplantacionales de ratón.
ABSTRACT
The growing interest in natural medicine makes it necessary to study plant properties as
well as their possible secondary effects. In recent years the toxic effects of many
medicinal plants on the preimplantational mouse embryo development have been studied. Many
of them produce malformations and alterations in the embryonic development. Ruta
graveolens "ruda", Origanum vulgare "oregano" and Persea
americana "palta" are used in rural areas to menstrual colic and to provoke
abortion (estrella, 1995). This study is aimed at assessing "in vivd'the effect of
extracts of "oregano", "ruda" and "palta" to 20% on the
morphology and growth of preimplantational mouse embryos.
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Todas las plantas fueron obtenidas de los
mercados de Lima e identificadas mediante las claves vigentes. En el laboratorio se
procedió al secado (colocándolas en la estufa a 60 °C durante 24 h) de las hojas de
ruda y orégano y, en el caso de la palta, la pepa rallada.
Se usaron ratones Albino-Swiss mantenidos en nuestro laboratorio bajo condiciones de
bioterio de 14 horas luz y 10 oscuridad. Hembras de 6 a 8 semanas de edad fueron cruzadas
con machos fértiles de 8 a 12 semanas, comprobándose la cópula al día siguiente por la
presencia del tapón vaginal. Las hembras preñadas fueron separadas en cuatro grupos:
Grupo control (al que se le suministro diariamente ad libitum agua potable); a
los demás grupos se suministro una infusión al 20% (p/v) de ruda, palta y orégano. El
extracto acuoso en todos los casos, fue preparado colocando 2g de cada planta en 10 m1 de
agua potable previamente calentada a 60 °C, se dejó en infusión durante 15 minutos mas
a la misma temperatura, se dejo enfriar y decantar, se separó el sobrenadante, el cual
fue suministrado a los animales en las mismas condiciones que el grupo control, hasta las
83 horas postcópula (hpc). La infusión fue renovada diariamente. Las hembras fueron
sacrificadas por dislocación cervical, y se les extirparon los oviductos y los cuernos
uterinos; luego los embriones fueron obtenidos por perfusión, mediante lavados sucesivos
con Buffer Fosfato Salino (PBS; SIGMA) pH 7,4. Los embriones se examinaron en un
microscopio de contraste de fase y se determinó el grado de viabilidad realizando una
evaluación morfológica considerando lo siguiente (Dom y Kramer, 1987): Grado 1: el
embrión es redondo y no tiene blastómeros libres; Grado 2: El embrión tiene
blastómeros libres; Grado 3: el embrión tiene blastómeros libres y malformaciones
severas; Degenerados: el embrión pierde su forma esférica, además presenta membrana(s)
celular(es) rotas. En la tabla 1 los embriones de grado 3 y degenerados son considerados
anormales. A los resultados se aplicó la prueba de x2.
TABLA N° 1
Calidad embrionaria y alteraciones en el desarrollo en porcentaje de embriones
preimplantaciones en los grupos control, ruda, palta y orégano.
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| d |
Grado 1 |
Grado 2 |
Grado 3 |
Degenerado |
Anormales |
Control
Ruda 20%
Palta 20%
Orégano 20% |
42.86(33)
51.02(25)
55.38(36)
52.00(26) |
42.86(33)
24.49(12)*
29.23(19)*
38.00(19) |
10.39(8)
24.49(12)*
3.08(2)*
2.00(1)* |
3.90(3)
0.00(0)*
12.31(8)*
8.00(4)* |
14.29(11)
24.49(12)*
15.39(10)
10.00(5) |
Número entre paréntesis son número de
embriones evaluados.
* Significativamente diferente del grupo de control (p<0.05). |
Nuestros resultados evidenciaron una
disminución significativa de embriones normales (grado 2) en los grupo ruda y palta
(Tabla 1). El grupo ruda presenta un porcentaje significativamente mayor de embriones
anormales que es de 24,49% frente a 14,29% en el grupo control (Tabla 1). En el grupo
palta se observa un aumento de embriones degenerados que es de 12,31 % frente a 3,90% en
el grupo control (Tabla 1). En cuanto al retraso en el desarrollo embrionario se observa
un incremento de embriones de 1 a 8 células en el grupo palta y a su vez se observa un
descenso en la ocurrencia de estadios posteriores como blastocisto expandido (Tabla 2).
Los embriones de los grupos ruda y orégano muestran un incremento en los estadios de
mórula compactada y blastocisto inicial evidenciándose un atraso ligero en el desarrollo
embrionario (Tabla 2). En el grupo orégano se observa un 10% de embriones anormales,
porcentaje menor al observado en el grupo control que presenta un 14,29% esta diferencia
no es significativa.
TABLA N° 2
Porcentaje de embriones por estadios.
|
| d |
1-8 cell |
M. no Comp. |
M.Comp. |
Blast. Ini. |
Blast. Tar. |
Blast. Exp. |
Control
Ruda 20%
Palta 20%
Orégano 20% |
5.2(4)
0.00(0)
12.32(8)*
6.00(3) |
2.60(2)
4.08(2)
0.00(0)
4.00(2) |
28.57(22)
46.94(23)*
32.31(21)
44.00(22)* |
16.88(13)
6.12(3)*
15.38(10)
4.00(2)* |
29.87(23)
30.61(15)
33.85(22)
24.00(12) |
16.88(13)
12.24(6)
6.15(4)*
18.00(9) |
| *Significativamente diferente del grupo
control (p<0.05). |
Paulini et al. (1991) reportaron una
actividad mutagénica de R. graveolens propiedad que se le atribuye a alcaloides
de la familia de los acridones, lo que apoya la hipótesis de un efecto tóxico de R.
graveolens. Así también se han reportado efectos anticonceptivos en ratas, y no se
ha observado el mismo efecto en hámster (Gandhi et al., 1991). Algunos autores proponen
que el aceite de la semilla de P. americana incrementa la actividad de la
fosfatasa alcalina; esta enzima está relacionada con procesos y mecanismos de
diferenciación temprana, a partir del estadio de 2 células (Werman et al., 1989), lo que
podría alterar el desarrollo embrionario normal. También hay reportes de que O.
vulgare tiene efectos antioxidantes, y se atribuye este efecto parcialmente a la
presencia del ácido rosmarínico, que le estaría confiriendo un poder protector contra
daño celular por oxidación (Lamaison, et al., 1990). Además se ha reportado que O.
vulgare posee actividad antimutagénica (Lagouri y Boskou, 1996), lo que explicaría
la menor incidencia de embriones anormales encontrados en el grupo orégano.
Bibliografia
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* Laboratorio de reproducción y Biología del Desarrollo, Facultad de Ciencias
Biológicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Av. Venezuela s/n. Casilla Postal
14-002, Lima, Perú.
E-mail: vbenavides23@hotmail.com
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