| Rev. Peru. Biol.
Vol. 7 • Nº 1 • 2000 |
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ESTUDIO PRELIMINAR DE LA
RESISTENCIA DE Vibrio cholerae O1,
BROTE EPIDÉMICO 1998, A ANTIMICROBIANOS
J. O. Ibarra1. L. E. Flores2,
R. H. García2 y D. E. Alvarado2
ABSTRACT
Thirty strains of V. cholerae O1 Ogawa and 2 Inaba, isolated during the outbreak of 1998,
were studied in relation to thier sensibility in front of 10 antibiotics of clinical use.
Nine strains were determined (28.1%) resistant to 1 up to 6 antibiotics. The SIDS-PAGE of
the studied strains exhibited similar pattern of bands.
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La presencia de Vibrio cholerae
O1 en el Perú tiene características endémicas, y la ocurrencia de la bacteria en
nuestro medio obedece a factores ambientales, por lo que durante el Evento El Niño
Oscilación Sur (ENOS) 1997-98 se incrementaron los casos de cólera (Colwell et. at.,
1998; Ibarra. et al., 1999). Generalmente, V. cholerae O1 es sensible a los
antimicrobianos utilizados en el tratamiento (Gotuzzo et al., 1994), pero se reporta su
resistencia a partir de los años 70. En el Perú se han realizado estudios relacionados a
la resistencia de la bacteria a antibióticos (Seto et al., 1992; Seas y Gotuzzo 1999),
así como al compuesto vibriostático O/129 (Ibarra y Alvarado 1999).
El presente trabajo tiene por objetivo estudiar la evolución de la resistencia de cepas
de V. cholerae O1 aisladas en los meses de verano de 1998, frente a antibióticos
de uso clínico.
Se estudiaron 32 estirpes de V. cholerae O1, de las cuales 30 eran Ogawa y 2
Inaba, todas aisladas entre enero y marzo de 1998 y pertenecientes a la colección del
Lab. de Microbiología Molecular de la Fac. de Ciencias Biológicas, UNMSM (Ibarra et al.,
1999).
Se utilizó el método de Bauer y col. (Bauer et al., 1966). Se emplearon discos
comerciales de Ampicilina (A)(10 µg), Cloramfenicol (C)(30 µg), Sulfatrimetoprim (Sx)(25
µg), Tetraciclina (T) (30 µg), Estreptomicina (S) (10 µg), Acido Nalidíxico (M)(30
µg), Furazolidone (Fz)(100 µg), Ciprofloxacina (Cip)(5 µg), Doxiciclina (Dxs)(30 µg) y
Eritromicina (EM)(5 µg). Se midieron los halos de inhibición en milímetros y la
interpretación se realizó según las normas establecidas por el NCCLS para
Enterobacteriaceae (NCCLS 1992).
Los aislados fueron cultivados en 10 mL de Caldo Triptosa por 18 h. Luego se centrifugaron
a 4500 rpm por 15 min suspendiéndose el sedimento en 1mL de agua bidestilada. Se mezcló
100 µL del cultivo con buffer de carga y se calentó en baño María por 10 min. Las
mezclas fueron sometidas a electroforesis en Gel de Poliacrilamida (SDS-PAGE) usando geles
de 12%. Como marcador de corrida se utilizó una proteína de amplio rango SIGMA (C3437)
(Bollag y Edelstein 1991). Los pesos moleculares de las proteínas se determinaron
graficando en papel semilogarítmico las distancias de migración frente a los pesos
moleculares de la proteína marcadora (Walker, 1984).
La resistencia a agentes antimicrobianos exhibida por las cepas de V. cholerae O1
estudiadas se muestra en la Tabla 1. Los antibióticos frente a los cuales la bacteria
muestra mayor resistencia fueron T, Sx y S (12,5%), lo cual indica una diferencia con
respecto a lo reportado en 1991, donde se determinó la sensibilidad de V. cholerae
O1 El Tor Inaba a la mayoría de antibióticos de uso farmacéutico (Tolmos, 1992). Se
encontraron 4 cepas multirresistentes, destacando un aislado que presentó resistencia a T
S C Sx M y Fz (3,1%). Se hallaron 7 antibiotipos siendo los más frecuentes: TSSx y EM
(6,3%) (Tabla 2). Estos resultados muestran claramente la necesidad de realizar
evaluaciones periódicas del espectro antimicrobiano; los hallazgos coinciden con estudios
realizados previamente en Italia y Albania (Falbo et al., 1999).
TABLA N° 1
Antibiograma de 32 cepas de Vibrio cholerae O1 aisladas de muestras
clínicas durante el brote epidémico. Lima, 1998.
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| Antibiótico |
Sensibilidad |
Intermedio |
Resistente |
| N |
% |
N |
% |
N |
% |
Tetraciclina
Cloramfenicol
Sulfatrimetropim
Ampicilina
Estreptomicina
Ácido Nalidíxico
Furazolidone
Ciprofloxacina
Doxiciclina
Eritromicina |
28
28
28
21
14
25
6
32
32
5 |
87.5
87.5
87.5
65.6
43.7
78.1
18.8
100.
100.0
15.6 |
0
2
0
10
14
5
23
0
0
25 |
0.0
6.2
0.0
31.3
43.7
15.6
71.8
0.0
0.0
78.1 |
4
2
4
1
4
2
3
0
0
2 |
12.5
6.5
12.5
3.1
12.5
6.2
9.4
0.0
0.0
6.2 |
TABLA N° 2
Espectros de resistencia a antibióticos de uso comercial producidas por estirpes
de Vibrio cholerae O1 aisladas de muestras clínicas. Lima, 1998.
|
| Antibiotipo |
Espectro de
resistencia antibióticos |
Aislados Clínicos |
Reistencia
(%) |
1
2
3
4
5
6
7 |
TSCSxMFz
TSCSx
TSSx
MFz
A
Fz
EM |
1
1
2
1
1
1
2 |
3.1
3.1
6.3
3.1
3.1
3.1
6.3 |
T: Tetraciclina (30)
C: Cloramfenicol (30)
Sx: Sulfatrimetropim (25)
S: Estreptomicina (10) |
A: Ampicilina (10)
M: Ácido Nalidíxico (30)
Fz: Furazolidone ( 100)
E: Eritromicina (15) |
Los perfiles proteícos de los diferentes
aislados de V. cholerae O1 estudiados fueron similares y estuvieron en un rango
de 45 a 104,8 kDa (Fig. 1). Las cepas Inaba y Ogawa presentaron el mismo patrón de
bandas. Cabe destacar que las cepas con resistencia a los diferentes antimicrobianos
utilizados presentaron perfiles proteicos similares en comparación a las que fueron
sensibles. Debido a que los perfiles proteicos de las diferentes estirpes de V.
cholerae O1 estudiadas presentaron un patrón homogéneo, no sería esta técnica una
alternativa para el estudio de la evolución de este patógeno en relación a la
resistencia a antimicrobianos y no brindaría información relevante que nos permita
realizar un seguimiento periódico para la vigilancia de cepas resistentes.
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Fig. 1:
Perfiles protéicos de Aislados de Vibrio cholerae O1. mk: Marcador; 1-4 y 1-6 V.
cholerae Ogawa; 5 V. cholerae Inaba; Resistencia antimicrobiana: a TSCSxMFz,
11 EM, 12 TSSx, 13 TSSx, 14 A. |
Los espectros de resistencia/sensibilidad
de los aislados de V. cholerae O1 del presente estudio a compuestos
antimicrobianos son diferentes a los de brotes epidémicos anteriores ocurridos en nuestro
país, reportándose aislados clínicos multirresistentes en baja frecuencia. El estudio
de los perfiles proteicos no proporciona información relevante con relación a la
resistencia a diferentes antibióticos utilizados en el tratamiento del cólera.
Bibliografía
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1. Fac. Ciencias naturales y Matemáticas, UNFV.
2. Lab. Microbiología Molecular. Fac. C.C. B.B., UNMSM. Aptdo. 720, Lima 1. E-mail: joit71@hotmail.com
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