Libertad Alzamora¹, Liliana Morales¹, Lourdes Armas¹, Gilma Fernández²

El objetivo fue la investigación cualitativa de la actividad antimicrobiana de los aceites esenciales de cinco plantas empleadas en Medicina Tradicional en el Perú: Eucalyptus globulus, Labill "eucalipto"; Cymbopogon citratus, (D.C.) Staff "hierba luisa"; Tagetes pusilla Lag. "Anís serrano"; Senecio tephrosioides, Turcz "huamanrripa" y Lepechinia meyenii, (Walp) Epling "salvia". Los aceites esenciales obtenidos por destilación por arrastre de vapor, se enfrentaron a Salmonella typhi ATCC 6539, S. typhimurium ATCC 14028, S. enteritidis INS, Vibrio cholerae ATCC E-7946 OGAWA, Pseudomonas aeruginosa GT 28, Shigella flexneri INS, Staphylococcus aureus INS, S. aureus ATCC 6538P y Candida albicans ATCC 10231. Se empleó discos de antibióticos como controles. Los aceites esenciales mostraron efecto variado sobre Gram positivos y Gram negativos; ninguno inhibió a Pseudomonas aeruginosa.

Palabras claves: Medicina Tradicional; Aceites Volatiles; Plantas Medicinales; Farmacognosia.

The objective was to investigate the antimicrobial qualitative activities of five plants used in Traditional Medicine in Peru: Eucalyptus globulus, Labill "eucaliptus"; Cymbopogon citratus, (D.C.) Staff "hierba luisa"; Tagetes pusilla, Lag "anis serrano"; Senecio tephrosioides, Turcz "huamanrripa" y Lepechinia meyenii, (Walp) Epling "salvia". The essential oils were prepared by steam distillation and tested against Salmonella typhi ATCC 6539, S. typhimurium ATCC 14028, S. enteritidis INS, Vibrio cholerae ATCC E-7946 OGAWA, Pseudomonas aeruginosa GT 28, Shigella flexneri INS, Staphylococcus aureus INS, S. aureus ATCC 6538P and Candida albicans ATCC 10231. Test was controlled with antibiotic discs. Essential oils showed diverse effects against both Gram positive and Gram negative microorganisms. None of these inhibited the growth of Pseudomonas aeruginosa.

Key words: Medicine, Traditional; Oils, Volatile; Plants, Medicinals; Pharmacognosy.

INTRODUCCIÓN

Los aceites esenciales son el producto final del metabolismo secundario de las plantas aromáticas. Están constituidos por terpenos con actividad y composición variada; después de la extracción generalmente son líquidos y rara vez sólidos o pastosos (1-5). Diversas investigaciones han permitido establecer su actividad antibacteriana, antimicótica, antiparasitaria, antiviral e insecticida (5-10). Tagetes pusilla, Lag "anís serrano" (Astereaceae), se desarrolla en los valles interandinos y ha sido reportada desde México hasta el noroeste de Argentina (11); se utiliza para aliviar malestares estomacales. Senecio tephrosioides, Turcz "huamanrripa" (Astereaceae), y Lepechinia meyenii, (Walp) Epling "salvia" (Lamiaceae), también se desarrolla en los valles interandinos del país (12,13) y se les emplea para el tratamiento de afecciones respiratorias. Estas tres especies son herbáceas y no se ha encontrado reportes acerca del efecto antimicrobiano de sus aceites esenciales.Eucalyptus globulus, Labill "eucalipto" (Myrtaceae), es un árbol cosmopolita cuyas propiedades antimicrobianas han sido demostradas por otros autores (10,14). Cymbopogon citratus, Staff (D.C.) "hierba luisa" (Poaceae), es una herbácea de distribución universal. En el país no se encontró reportes sobre su efecto antimicrobiano, en Africa Onawunni (15) determinó su poder bactericida.

El objetivo fue la evaluación cualitativa in vitro de las propiedades antimicrobianas de los aceites esenciales de las cinco plantas aromáticas referidas, sobre diez microorganismos de importancia en salud pública y la validación de su empleo en la Medicina Tradicional peruana.

Recolección e identificación taxonómica: Tagetes pusilla, Senecio tephrosiodes y Lepechinia meyenii fueron recolectadas de las provincias de Huaraz y Caraz en Ancash; Eucalyptus globulus de la provincia de Pampas  en Huancavelica y Cymbopogon citratus del valle de Cañete en Lima. Se las identificó según el sistema de Engler & Prant, modificado por Melchior en el Museo de Historia Natural Javier Prado de la UNMSM.

Extracción de aceites esenciales: Por el método de destilación por arrastre de vapor de agua a partir de plantas frescas (4).

Microorganismos: Salmonella typhi ATCC 6539, S. typhimurium ATCC 14028, S. enteritidis serotipo Newport INS, Vibrio cholerae ATCC E-7946 OGAWA, Pseudomonas aeruginosa GT 28, Shigella flexneri INS, Staphylococcus aureus ATCC 6538P, S. aureus INS, la levadura Candida albicans ATCC 10231. (INS: Instituto Nacional de Salud, ATCC: American Type Culture Collection, GT: Hospital Pediátrico de Toronto).

Descripción del método de aromatograma de Duraffourd (3) modificado: Los cultivos fueron estandarizados por turbidimetría con el tubo N° 1 de la escala de Mc Farland (3 x 108 microorganismos por mL). La modificación del método consistió en el uso de agar Infusión Cerebro-Corazón (BHI) a 40-45°C, mezclado con 0,1 mL del cultivo estandarizado, que se vertió sobre una delgada capa base de agar nutritivo solidificado. Duraffourd (3) no empleó la capa base de agar que permitió una mejor visualización de los halos de inhibición del crecimiento del microorganismo (HICM).

Los discos de papel Whatman Nº1 de 6 mm de diámetro fueron impregnados, el mismo día de la prueba, con 5 mL de aceite esencial puro y filtrado; se los aplicó sobre los inóculos y se les incubó a 37°C por 18 horas. La actividad se consideró en función al diámetro del HICM (3): nula (–) si fue inferior o igual a 8 mm; sensibilidad límite (sensible = +) de 9 a 14 mm; media (muy sensible = ++) de 15 a 19 mm y sumamente sensible (S.S. = +++) si fue igual o superior a 20 mm.

Elaboración de los perfiles aromáticos: Se trazó los diámetros de los HICM para cada microorganismo, con cada aceite evaluado (3).

Controles positivos: Los antibiogramas fueron realizados en las mismas condiciones que los aromatogramas. Se empleó discos de antibióticos comerciales (Emerme, Perú): sulfametoxazol + trimetropim (sxt) 25 mg, tetra-ciclina (Ttr) 20 mg, penicilina V (pni) 10 UI, ampicilina (amp) 25 mg, cloramfenicol (clr) 30 mg. Para Candida albicans, se empleó discos impregnados con antimicóticos comerciales en las siguientes concentraciones: micoral (mic) 100 mg; esporostatin (esp) 330 mg, micostatin (mct) 10 000 UI y oxonasol (oxn) 200 mg.

Aceites esenciales en las hojas de las plantas aromáticas:

La cantidad de aceite extraído fue variable. En el caso de T. pusilla y C. citratus se calculó que 1% del peso total de la planta fresca correspondía

La aceite esencial, para S. tephrosioides fue 0,8%, para L. meyenii 0,8%; E. globulus tuvo mayor cantidad, habiéndose obtenido 0,6 mL (3%) por cada 100 g de hojas.

Actividad de los aceites esenciales sobre microorganismos:

Los resultados de la Tabla 1 están referidos al efecto de los aceites sobre bacterias Gram positivas y Gram negativas.

El aceite esencial que ejerce mayor efecto sobre las bacterias evaluadas es el de "hierba luisa" (88,8%); las dos cepas de Shigella flexneri sólo fueron sensibles al sulfametoxazol + trimetropim (20 mm) y a los aceites de "hierba luisa" (HICM de 30 mm) y en menor grado a los de "eucalipto". Los valores de HICM podrían ser indicadores de mayor potencia del aceite esencial de "hierba luisa" sobre esta bacteria causante de la disentería bacilar. Sin embargo, P. aeruginosa se muestra resistente.

Igualmente significativo es el efecto de los aceites de "eucalipto" (88,8%), con la diferencia de que la sensibilidad de las bacterias se encuentra en el límite; sólo V. cholerae muestra sensibilidad media.

Los aceites de "huamanrripa" mostraron efecto moderado sobre el 66,6% de bacterias. Menos efectivos fueron los de "anís serrano" y "salvia", ambos resultaron efectivos sobre 22,2% de las bacterias evaluadas. Se destacó la actividad del aceite de "anís serrano", que mostró un excelente efecto sobre V. cholerae, no sólo superior al de los demás aceites probados, sino también al de los antibióticos tomados como controles de la prueba. Esta evaluación se repitió 6 veces para confirmar el HICM, que fue 91 mm (Figura 1).

La "salvia" mostró efecto restringido a las dos cepas de S. aureus. En el aromatograma realizado con el aceite esencial de la "huamanrripa" frente al cultivo de S. aureus INS, se evidenció la presencia de dos HICM, el interno clarificado (que se tomó en cuenta para determinar el efecto) y el externo, con la presencia de colonias que aparentemente son resistentes; además, se obtuvo un halo sinuoso e irregular (Figura 2).

C. albicans resultó muy sensible a los aceites de "anís serrano" y "hierba luisa", con baja sensibilidad para los aceites de "huamanrripa" y "eucalipto" y fue resistente a los de "salvia" (Tabla 2).

Las Figuras 3 y 4 muestran los perfiles aromáticos de los microorganismos Gram positivos y Gram negativos evaluados y permiten evidenciar los resultados referidos. Destaca el perfil aromático de C. citratus.

DISCUSIÓN

Se confirma la actividad antimicrobiana (que podría ser bactericida o bacteriostática y fungicida o fungistática, dependiendo del caso) de algunos de los aceites aromáticos evaluados, coincidiendo con los reportes realizados por Ahmed (6), Demetzos (7), Singh (8), Saxena (9), Kumar (10), Dellacasa (14), Onawunni (15), Prasad (16), entre otros investigadores.

Los resultados obtenidos permiten validar el uso popular del "anís serrano" y de la "hierba luisa" en el tratamiento de afecciones intestinales, como la salmonelosis y el cólera. El empleo tradicional de la "huamanrripa", el "eucalipto", la "hierba luisa" y la "salvia" en el tratamiento de procesos respiratorios causados por bacterias como St. aureus tendría sustento científico. El aceite de "salvia" no mostró actividad sobre ninguna de las bacterias Gram negativas empleadas.

La baja actividad del aceite de "salvia" podría estar relacionada con su naturaleza serosa, a diferencia de los demás que son fluidos. A 45°C el aceite de "salvia" también es fluido, pero los cultivos se realizaron a 37°C, lo cual afectaría su capacidad de difusión en el medio.

Respecto a la levadura oportunista C. albicans, resulta interesante que los aceites esenciales de T. pusilla "anís serrano" y C. citratus "hierba luisa" ejerzan un efecto similar al del micostatín (único antimicótico al que fue sensible). Como un dato adicional es válido informar que el tratamiento tópico de una uña del pie visiblemente afectada por hongos, con gotas de aceite esencial puro de "hierba luisa", permitió evidenciar su potente efecto, ya que con una sola aplicación se observó remisión del proceso sin ocasionar daño al tejido sano circundante [Dato no publicado]. Este aceite esencial se perfila como una opción en el tratamiento de micosis ocasionadas por esta levadura, recomendándose los respectivos estudios de toxicidad.

Con relación a P. aeruginosa, los resultados concuerdan con los de Kumar (10) y Dellacasa (14) quienes reportaron su resistencia a los aceites esenciales de "eucalipto", ninguno de los otros cuatro aceites tuvieron efecto sobre esta bacteria que resultó ser la más resistente de todas las evaluadas.

Se hace necesario realizar los respectivos bioensayos ya que los aceites esenciales se presentan como prometedores medicamentos alternativos.

AGRADECIMIENTOS

Al Consejo Superior de Investigación de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos y al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONCYTEC) por financiar la presente investigación.

Ver Bibliografía

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