REVISION DE REVISTAS

PERSISTENCIA BACTERIANA DENTRO DE ERITROCITOS: UNA ESTRATEGIA PATOGENICA UNICA DE Bartonellasp. Bacterial persistance within erythrocites: a unique pathogen ic strategy of Bartonelia sp.
Seubert A, Schulein R, Dehio C.
Int J Med Microbiol 2002, 291: 555?60.

El g6nero Bartonella tfpicamente invade eritrocitos en sus reservorios marniferos. El avance de estudios de modelos de infecci6n in vivo e in vitro y el desarrollo de herramientas para la manipulaci6n gen6tica de Bartonella ha permitido abordar el estudio de la patogenicidad de la bartonelosis.

Bartonella presenta un estilo de vida hemotr6pico que se caracteriza por un prolongado periodo de parasitismo intra?eritrocitario. Uno de los mejores modelos para el estudio de este parasitismo es la infecci6n do ratas con Bartonella tribocorum. En este modelo de infecci6n, despu6s de la inoculaci6n de B. tribocorum se observa una r6pida disminuci6n de la bacteremia del torrente sangufneo, reapareciendo despu6s de 4 o 5 dias de la inoculaci6n. Se piensa que la Bartonella infecta un nicho primario el cual no se conoce, desde donde luego ingresa en oleadas al torrente sangufneo cada 5 dfas. La bacteria en el torrente sangufneo se adhiere e invade eritrocitos maduros, dentro de estos eritrocitos [a Bartonella experimenta un corto periodo de multiplicaci6n intracelular y que subsiste por ocho a diez semanas. Similares observaciones son descritas en el modelo murino de B. grahamfi.

Poco se conoce acerca de las bases moleculares que expliquen la capacidad de invasi6n a eritrocitos. Recientemente se ha descrito al locus virB en B. hensenlae y B, tribocorum; este locus es similar al sistema VirB de Agrobacterium turnefaciens el cual consiste de 11 protefnas que construyen un complejo poro que atraviesa la membrana externa e interna bacteriana y posiblemente la membrana celular del hospedero, permitiendo la translocaci6n de protefnas directamente desde el citoplasma bacteriano al citoplasma del hospedero. Tambi6n se ha descrito el gen iba de B. hensenlae que codifica una protefna autotransportadora; este gen es activado durante la etapa temprana de la invasi6n de los eritrocitos, pero r6pidamente es reprimida despu6s de [a invasi6n; posiblemente la funci6n de este gen es; establecer la infecci6n hemotr6pica.

Estas observaciones dan nuevas luces de la patogenia de la bartonelosis. No se puede descartar que mecanismos hom6logos puedan estar involucrados durante la infecci6n de B. bacilliformis al hombre.

Revisado por Blgo. Carlos P Padilla Rojas
Divisi6n de Biologfa Molecular
Centro Nacional de Salud Pdblica
Instituto Nacional de Salud

UN FACTOR DE VIRULENCIA NECESARIO PARA LA DISEMINACON EXTRAPULMONAR DE Mycobacterium tuberculosis.
The heparin?binding haemaglutinin of Mycobacterium tuberculosis is required for extrapulmonary dissemination. Pethe K, Alonso S, Biet F, Delogu G, Brennan MJ, Locht C. Menozzi FD.
Nature 2001; 412(6843): 190?4.

Uno de los factores que hace que la tuberculosis sea tan dificil de tratar es la forma como M. tuberculosis se disernina desde los pulmones hacia otras partes del cuerpo. A pesar de la publicaci6n de su genoma, el rol de la infecci6n extrapulmonar en la reactivaci6n de la enfermedad y los factores bacterianos implicados en ello contin6an siendo desconocidos campos de estudio.
Recientemente, Kevin Pethe, del Instituto Pasteur, y sus colaboradores publicaron en Nature (Jul 12;412(6843):190?4) un art1c:ulo en ell cual demuestran que ell proceso de diseminaci6n extrapulmonar desde el tejido pulmonar depende de la interacci6n entre una adhesina (HBHA) y c6lulas epiteliales del hospedero. Para ello, Pethe y col. generaron mutantes de M. tuberculosis y M. bovis?BCG con el locus hbhA (gen que codifica HBHA) anulado, con los cudles realizaron ensayos de citoadherencia e invasi6n en cultivo de c6lulas tipo macr6fagos y c6lulas epiteliales (neumocitos). Ensayaron tambi6n en ratones BALB/c, infectdndolos intranasalmente y midiendo la recuperaci6n de bacterias desde pulmones y bazo en varios tiempos. Finalmente, infectaron ratones con bacterias silvestres, con y sin anticuerpos monoclonales anti?HBHA (Ab?anti H13HA), y midieron la recuperaci6n de bacterias desde pulmones y bazo.

Las cepas mutantes no disminuyeron en su capacidad para adherirse e invadir c6lulas tipo macr6fago; sin embargo, la adherencia y la invasi6n en c6lulas neumocitos disminuyeron en 60% y 80%, respectivamente. Asimismo, los; ensayos In vh1o' mostraron similares perfiles de colonizaci6n en los pulmones de las cepas mutantes y silvestres, mientr,as que en bazo, la cepa mutante present6 una reducida capacidad de persistencia. Por 61timo, no existi6 diferencia significativa en la colonizaci6n pulmonar entre bacterias con , sin, _ anti HBHA, aunque se observ6 una reducci6n de la colonizaci6n en el bazo de bacterias con Ab?anti HBHA.

Los resultados; sugieren que la adhesina Hl3HA es requerida para la diseminaci6n extrapulmonar y que su interacci6n con c6lulas no fagocfticas es importante en la patogdnesis de la tuberculosis. Estos hallazgos deben ser el punto de partida para futuros experimentos con el fin de elucidar el mecanismo molecular por el cual el bacilo sale del tejido pulmonar y establece la invasi6n hacia otros tejidos extrapulmonares. Ademds, la presencia de la adhesina en otras micobacterias, tal como M. leprae, sugiere que ellos podrfan compartir una misma via de diseminaci6n sist6mica a partir de superficies mucosas, siendo un potencial blanco para el desarrollo de nuevas vacunas y drogas.

Revisado por Blgo. Christian Baldeviano Vidal6n
Divisi6n de Biologfa Molecular
Centro Nacional de Salud Pilblica
Instituto Nacional de Salud

ABSORCi6N APARENTE DE COBRE DE UNA DIETA VEGETARIANA
Apparent copper absorbtion from a vegetarian diet Hunt JR, Vanderpool RA.
Am J Clin Nutr 2001; 74(6):803?7.

Las dietas vegetarianas contionen frecuentemente mAs cobre que las dietas no vegetarianas, pero observaciones; en la

disminuci6n del cobre plasmAtico asociado a dietas vegetarianas sugieren que estas tienen m6s baja biodisponibilidad de cobre que las dietas no vegetarianas. Por tanto, el objetivo fue determinar la absorci6n aparente de cobre de dietas controladas lactoovovegetarianas (LOV) y dietas no vegetarianas (NV).

El estudio se efectu6 en 18 muieres de 20?43 ahos de edad que consurnieron durante dos perfodos de cuatro semanas cada uno, dietas LOV y NV, pesadas con anterioridad y asignadas al azar. Las dietas LOV y NV proporcionaron 1,45 mg y 0,94 mg de cobre, 38 g y 16 g de fibra dietaria, y 1584 mg y 518 mg de 6cido fftico, respectivamente, por 9,2 MJ (2200 kcal). Despu6s que las mujeres consumieron cada dieta por 4 semanas, se determin6 la absorci6n aparente de cobre por medici6n en la excreci6n fecal del is6topo estable Cu65, extrfnsicamente adicionado a[ men6 como CuCl 2 65.

La ceruloplasmina y el cobre plasmMico no fueron afectados por la dieta. La eficiencia de absorci6n aparente de cobre de la. dieta LOV fue menor (33%) que de la dieta NV (42%) (DS del pool: 9%; p< 0,05), sin embargo, como la dieta LOV contenia aproximadamente 50% mAs cobre, la absorcion aparente total de la dieta LOV (0,48 mg/d) fue mayor que de la dieta NV (0,40 mg/d) (IDS del pool: 0,09 mg; p< 0,05).

El trabajo concluye que el cobre fue menos eficientemente absorbido de una dieta vegetariana que de una dieta no vegetariana, siendo la absorci6n aparente total de cobre mayor en la dieta vegetariana por tener un contenido m.1s grande de cobre.

Se dernuestra claramente la influencia de la fibra dietaria y de los fitatos, como factores negativos para la absorci6n de micronutrientes minerales, especfficamente cationes divalentes como el cobre.

Revisado por Lic. Nutr. Ivin G6mez?S6nchez Prieto
Dwidn de Evahmcton Sensonal y Transformadon de Afirnentos Centro Nacional de Alimentaci6n y Nutrici6n
Instituto Nacional de Salud

GWAS GENERALES DE M&ODOS DE VALlDAC16N PARA MUESTRAS FARMACtUTICAS
General method validation guidelines for pharmaceutical samples
Inman EL, Frischmann A Jimenez PJ, Dwinkell G, Persinger M, Rutherford B.
J Cromatografic Science 1987; 25: 252?6.

En este artfculo los autores ponen en relevancia que la validaci6n es parte fundamental en el desarrollo de un m6todo analftico y que las gufas sobre validaci6n constituyen una importante ayuda para sistematizar el desarrollo de un m6todo. Estas gufas estin organizadas sobre la base de la concentraci6n del analito, la matriz y siete pardmetros de validaci6n: linealidad, precisi6n, recuperaci6n especificidad, estabilidad de las soluciones a medir, Ilmite de detecci6n y efecto de la matriz, presentados en tres; tablas interesantes que ayudan al diseho de un esquema de validaci6n; asimismo, para cada pardmetro de validaci6n se presenta dos o tres procedimientos al escoger segUn la concentraci6n del analito y su matriz.

Aquf hay dos pardmetros importantes que resaltar: Primero, el efecto de la matriz que se refiere a las propiedades ffsico?qufmicas de un fdrmaco en relaci6n con las sustancias qufmicas empleadas en su sfntesis y, en general, a todos aquellos factores inmersos en el desarrollo mismo de un nuevo firmaco; y segundo, la estabilidad de las solu?

ciones para precisar el periodo dentro del cual se realizard la evaluaci6n, sin que se perjudique la exactitud.

Serfa importante considerar, ademds de los parAmetros sefialados en este artfculo, el Ifmite de cuantificaci6n, indicado por [a Farmacopea de los Estados Unidos.

Se concluye que la validaci6n es Onica. para cada m6todo y debe ser consistente con el prop6sito del m6todo, del analito y su matriz.
Q.F Luis Moreno Exebio
Q.F Maria Antonieta Niho de GuzmJn
Centro Nacional de Control de Calidad
Instituto Nacional de Salud

INMUNODIFUsi6N EN GEL AGAR CON POUSACARIDO DE MEMBRANA DE BrucellaabortusCEPA 1119?3 PARA EL DlAGN6sTiCO DE BRUCELOSIS BOVINA
Membrane polysaccharides of Brucella abortus 1119?3 in agar gel immunodifusion test in diagnosis of bovine brucellosis.
Megid J, Ribeiro MG, Agottani JV13, Marcos G. Arq Bras Med VetZootec 1999; 51(5): 433?7.

El estudio es una comparaci6n del resultado del test de inmunodifusi6n en gel agar (IDGA) con los m6todos convencionales de seroaglutinaci6n r6pida (SAR), seroaglutinaci6n lenta en tubos (SAT), antfgeno tamponado rosa de bengala (ATA), y 2 Mercaptoetanol (2?ME) para el diagn6stico de brucelosis.

La investigaci6n se basa en los ensayos de extracci6n del lipopolisac&do POLI 0 obtenido de la membrana de Brucella abortus cepa 1119?3 y su aplicaci6n en la t6cnica de diagn6stico de la brucelosis en hatos bovinos vacunados con Brucella abortus cepa 19 y bovinos infectados naturalmente.
Los resultados dernuestran una alta especificidad, pero baja sensibilidad. La especificidad se verific6 en la correlaci6n de los resultados negativos del IDGA en sueros de animales vacunados que no presentaron infecci6n. La sensibilidad de la prueba IDGA se correlacion6 con un 75% en sueros de animales infectados con tftulos mayores o iguales a 1/200 en relaci6n con las pruebas se seroaglutinaci6n de uso convencional. La sensibilidad se increment6 con sueros de tftulos mayores a 1/200. Animales infectados con bajo tftulo de anticuerpos no presentaron precipitaci6n a la prueba I DGA.

Las reacciones; de precipitaci6n en la prueba IDGA fueron predominantes en sueros de t[tulos iguales o mayores; a 1/ 200 con una correspondencia del 88,2% con el SAR, 60% con el SAT, y 68% con el 2?ME. S61o en sueros de t1tulos mayores a 1/200 la correlaci6n de las pruebas SAR, SAT, y 2ME fue del 90%. La correlaci6n con el ATA fue del 58,9%.
Las dificultades en diferenciar las reacciones propias de una infecci6n frente a reacciones post?vacunaci6n se deben principalmente a la persistencia de las inmunoglobulinas en animales vacunados con la cepa 19, lo que representa un serio problema en el control y erradicaci6n de la brucelosis en los paises que utilizan las vacunas atenuadas aglutinog6nicas.

Es por ello que resulta una buena opci6n la utilizaci6n de diferentes protocolos de extracci6n de antfgenos de la membrana de Brucella sp para la prueba IDGA como un m6todo alternativo para el control y diagn6stico de la brucelosis en hatos bovinos vacunados.

Revisado por M. V Marlene Cirdenas Canales
Centro Nacional de Producci6n de Biol6gicos
Instituto Nacional de Salud

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